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pigpig-877

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于单细菌菌落测试测序不出来的问题 已有3人参与

分离纯化的单细菌菌落,送去测序,提取的DNA和PCR后的产物都有条带,但是测序发现序列太短,只有1300,甚至测不出来,什么原因?谢谢各位大侠拔刀帮助哇
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

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感谢参与,应助指数 +1
引物的问题? 27F,1492R?还是M13克隆测序
2楼2014-03-22 23:14:39
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pigpig-877

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-22 23:14:39
引物的问题? 27F,1492R?还是M13克隆测序

7F , 1540R,序列测出来大概只有1300,甚至测不出来
3楼2014-03-22 23:41:36
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pigpig-877 at 2014-03-22 23:41:36
7F , 1540R,序列测出来大概只有1300,甚至测不出来...

你引物错了吧,你是测的克隆序列还是测通啊

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-03-23 00:24:40
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-23 00:24:40
你引物错了吧,你是测的克隆序列还是测通啊
...

你是测根瘤放线菌吧,也可以用通用细菌引物来测,啥公司,说测不出来,浓度太低?信息给全点

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-03-23 00:29:33
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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会不会是假阳性啊,所以才没测出来。。

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6楼2014-03-23 10:07:25
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雷杨琴

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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pigpig-877: 金币+20, 才赢浓缩试试 2014-03-25 23:43:24
以前也遇到测不出来的问题,PCR条带很亮,但测序公司始终说浓度太低,无法回收,试了好几次都这样。后面自己胶回收4管混在一起后再送去测序,结果还真测出来了。建议楼主尝试一下。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2014-03-23 11:11:38
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pigpig-877

铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by rv1nm2y at 2014-03-23 10:07:25
会不会是假阳性啊,所以才没测出来。。

没有做克隆,不存在假阳性的说法吧
8楼2014-03-25 23:40:41
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pigpig-877

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 雷杨琴 at 2014-03-23 11:11:38
以前也遇到测不出来的问题,PCR条带很亮,但测序公司始终说浓度太低,无法回收,试了好几次都这样。后面自己胶回收4管混在一起后再送去测序,结果还真测出来了。建议楼主尝试一下。

PCR条带确实很亮,那我试试,谢谢小雷同志
9楼2014-03-25 23:41:31
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pigpig-877

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-23 00:24:40
你引物错了吧,你是测的克隆序列还是测通啊
...

引物没有错,测通,细菌的通用引物,谢谢版主
10楼2014-03-25 23:42:49
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