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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单菌落过夜摇菌为什么摇不出来呀？急求
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_然然

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】单菌落过夜摇菌为什么摇不出来呀？急求 已有11人参与

我用保存的菌液涂板，挑单菌落后过夜摇菌，LB液澄清，为什么摇不出来呀？
还有为什么有的保存菌液化了之后液体里有絮状沉淀，这是什么，这管菌液还能用吗？
急需大家的帮助，谢谢！
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1楼 2011-03-21 11:44:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-03-21 15:04:33
摇不出来：1.看看LB抗生素有没有弄错；2.可能菌保存太久活力不行了，试试挑菌划到新的平板上，长出来了再摇菌。
“液化”一说不明白，我们实验室的菌用加甘油保存，冻在-20℃和-80℃，但是不结冰的哦。结冰的话貌似菌会挂掉吧，冰晶会伤害到细胞。
我碰到过甘油冻存的菌出现絮状沉淀的，直接接到LB液体里摇不起来，沉淀可能是挂了的菌吧。后面把这管菌用枪打匀，取一点划到板上，长起来后就可以用了。
希望有帮助哦
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2楼2011-03-21 11:59:56
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-21 11:59:56:
摇不出来：1.看看LB抗生素有没有弄错；2.可能菌保存太久活力不行了，试试挑菌划到新的平板上，长出来了再摇菌。
“液化”一说不明白，我们实验室的菌用加甘油保存，冻在-20℃和-80℃，但是不结冰的哦。结冰的话貌 ...

LB没问题，因为摇其他的菌没事。
第二天又重新挑的单菌落过夜摇还是没有。郁闷中。
你们保菌甘油浓度是多大，我们的是25%，放在-20℃每次都是冻得，我们也很疑惑，不过化了后再拿保的菌涂板然后摇菌，效果还行。
有絮状的冻存菌液直接在LB里摇没有长，涂板后长了很少量单菌落，已经摇了菌了，送去测序了，希望是正确的。
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3楼2011-03-22 09:14:28
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angel_yy

金虫 (正式写手)
看是否 有噬菌体污染
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4楼2011-03-22 09:35:58
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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引用回帖:
Originally posted by _然然 at 2011-03-22 09:14:28:
LB没问题，因为摇其他的菌没事。
第二天又重新挑的单菌落过夜摇还是没有。郁闷中。
你们保菌甘油浓度是多大，我们的是25%，放在-20℃每次都是冻得，我们也很疑惑，不过化了后再拿保的菌涂板然后摇菌，效果还行 ...

我们-20℃用50%的甘油，-80℃用15%。
平板上的菌放久了活力低，摇不起来的。你试试挑个单菌落，划到新鲜的平板上，如果长起来了再过夜摇咯。
祝好运！
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5楼2011-03-22 10:11:22
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
冻存的菌液最好活化一下再摇菌。
甘油保菌一般冻在-80，是结冰的，对细胞不会有太大影响。我们的感受态细胞都是这样放置的
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一直向前！
6楼2011-03-22 12:28:17
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我以前遇到过这样的问题过，总结一下原因
1.菌种退化，这个就必须重新活化菌种
2.刚活化的菌，必须继代培养四五个周期才能摇起来
3.抗生素的浓度太大
4.培养基的成分，尤其是蛋白胨，我用国药的蛋白胨鱼粉就能摇起来，用另一家公司的就不行
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风雪夜归人
7楼2011-03-22 13:18:28
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hulqi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-22 12:28:17:
冻存的菌液最好活化一下再摇菌。
甘油保菌一般冻在-80，是结冰的，对细胞不会有太大影响。我们的感受态细胞都是这样放置的

这样需要热激复活
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8楼2011-03-22 17:37:56
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-22 10:11:22:
我们-20℃用50%的甘油，-80℃用15%。
平板上的菌放久了活力低，摇不起来的。你试试挑个单菌落，划到新鲜的平板上，如果长起来了再过夜摇咯。
祝好运！

恩 好的  我试试 谢谢喽  试验顺利哦
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9楼2011-03-23 09:43:27
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by angel_yy at 2011-03-22 09:35:58:
看是否 有噬菌体污染

怎么看呀 刚做这方面不太懂
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10楼2011-03-23 09:43:59
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