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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单菌落过夜摇菌为什么摇不出来呀？急求
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_然然

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】单菌落过夜摇菌为什么摇不出来呀？急求已有11人参与

我用保存的菌液涂板，挑单菌落后过夜摇菌，LB液澄清，为什么摇不出来呀？
还有为什么有的保存菌液化了之后液体里有絮状沉淀，这是什么，这管菌液还能用吗？
急需大家的帮助，谢谢！
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1楼2011-03-21 11:44:21
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-21 11:59:56:
摇不出来：1.看看LB抗生素有没有弄错；2.可能菌保存太久活力不行了，试试挑菌划到新的平板上，长出来了再摇菌。
“液化”一说不明白，我们实验室的菌用加甘油保存，冻在-20℃和-80℃，但是不结冰的哦。结冰的话貌 ...

LB没问题，因为摇其他的菌没事。
第二天又重新挑的单菌落过夜摇还是没有。郁闷中。
你们保菌甘油浓度是多大，我们的是25%，放在-20℃每次都是冻得，我们也很疑惑，不过化了后再拿保的菌涂板然后摇菌，效果还行。
有絮状的冻存菌液直接在LB里摇没有长，涂板后长了很少量单菌落，已经摇了菌了，送去测序了，希望是正确的。
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3楼2011-03-22 09:14:28
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-22 10:11:22:
我们-20℃用50%的甘油，-80℃用15%。
平板上的菌放久了活力低，摇不起来的。你试试挑个单菌落，划到新鲜的平板上，如果长起来了再过夜摇咯。
祝好运！

恩 好的  我试试 谢谢喽  试验顺利哦
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9楼2011-03-23 09:43:27
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by angel_yy at 2011-03-22 09:35:58:
看是否 有噬菌体污染

怎么看呀 刚做这方面不太懂
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10楼2011-03-23 09:43:59
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-22 12:28:17:
冻存的菌液最好活化一下再摇菌。
甘油保菌一般冻在-80，是结冰的，对细胞不会有太大影响。我们的感受态细胞都是这样放置的

呵呵  谢了 活化是指涂板吗？
我们的甘油保菌一般放在-20
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11楼2011-03-23 09:45:22
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-22 13:18:28:
我以前遇到过这样的问题过，总结一下原因
1.菌种退化，这个就必须重新活化菌种
2.刚活化的菌，必须继代培养四五个周期才能摇起来
3.抗生素的浓度太大
4.培养基的成分，尤其是蛋白胨，我用国药的蛋白胨鱼粉就能 ...

呵呵 O(∩_∩)O谢谢
我想问问  活化菌种你们怎么活化？
          刚活化的菌怎么继代培养？
          我们的最后抗生素浓度是100ug/ml，你们的是多大呀？
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13楼2011-03-23 10:03:27
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-23 09:56:47:
活化指平板划线或涂板，放在-80保存时间会更久一点

谢谢   试验顺利哦
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14楼2011-03-23 10:04:43
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2011-03-22 17:37:56:
这样需要热激复活

请问什么是热激活？
我们保存的菌放在-20一般都冻了，那在活化的时候应该怎么办？直接融化还是像你说的热激活？
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15楼2011-03-23 10:07:20
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by angel_yy at 2011-03-23 16:17:30:
噬菌体污染的现象主要有
1．培养物裂解（突然的光密度降低，过夜培养后细菌密度很低等）
2．可以在培养液中看到团，块等
3．培养液中出现了稠密的白色泡沫（即使培养液密度很高），即使该摇瓶在桌上放置了很 ...

谢谢  好像没有这方面现象
试验顺利哦
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22楼2011-03-24 09:44:41
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_然然

金虫 (正式写手)
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Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-23 13:40:54:
活化菌种如果是从-80拿出来的话冻存管，快速溶解后用接种针蘸取后涂布于平板，培养，接着就连续继代
继代就是平板接平板
抗生素浓度看具体是什么抗生素了

我们用的抗生素有amp和kan 使用浓度都是100ug/ml
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23楼2011-03-24 09:46:07
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