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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电转后摇菌菌成团生长
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asuo

[交流] 电转后摇菌菌成团生长 已有2人参与

质粒带有氯霉素抗型基因，为温敏型质粒，在40度以上生长时会丢失，感受态细胞为单核增生李斯特菌。电转后，挑取抗性平板上且经过PCR验证正确的单克隆摇菌进行同源重组，但是在41度摇菌总是很怪异，菌总是成团地生长（在37度一切正常），开始以为是抗生素加多了，但是不加抗生素，在41度仍这样。后来纯化菌株重新电转，仍是这样的问题，只要在41度它就成团地生长，实在找不到原因了，还望有人能指点一下。
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1楼 2009-10-12 14:50:48
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
菌成团生长后质粒还会丢掉吗？我遇到过加入某些抗生素摇菌时菌很容易沉淀的情况。
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2楼2009-10-12 21:29:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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该温敏型质粒转其他菌在41℃摇的时候会出现这种情况吗？还有只是这种菌在41℃摇的时候会出现这种情况吗？楼主可以试试。
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3楼2009-10-12 21:32:42
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asuo

我把转化子接到不加任何抗生素的培养基里，在41度还是那样，所以可以排除抗生素的影响；
    该转化子只有在41度摇得时候这样，别的情况都很正常。没有试过转入其它的菌，转进去了没有同源臂不能进行同源重组，质粒整合不到基因组上在41度丢失还是长不起来。
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4楼2009-10-15 15:33:52
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1985228

铁虫 (小有名气)

求电转单增李斯特菌感受态细胞的制备

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
各位师兄师姐，谁那里有电转单增李斯特菌感受态细胞的制备方法啊？能不能指点下，不胜感激
我的邮箱是zhanghongjuan228@126.com
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5楼2010-06-16 23:50:20
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1985228

铁虫 (小有名气)

求电转单增李斯特菌感受态细胞的制备

各位师兄师姐，谁那里有电转单增李斯特菌感受态细胞的制备方法啊？能不能指点下，不胜感激
我的邮箱是zhanghongjuan228@126.com
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6楼2010-06-16 23:50:52
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huan121004

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在做李斯特的电转，话说有的基因怎么转都转不进去？  电转后板上什么也不长
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我要努力 成为 女王
7楼2018-01-12 10:06:19
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