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asuo

[交流] 电转后摇菌菌成团生长已有2人参与

质粒带有氯霉素抗型基因,为温敏型质粒,在40度以上生长时会丢失,感受态细胞为单核增生李斯特菌。电转后,挑取抗性平板上且经过PCR验证正确的单克隆摇菌进行同源重组,但是在41度摇菌总是很怪异,菌总是成团地生长(在37度一切正常),开始以为是抗生素加多了,但是不加抗生素,在41度仍这样。后来纯化菌株重新电转,仍是这样的问题,只要在41度它就成团地生长,实在找不到原因了,还望有人能指点一下。
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

菌成团生长后质粒还会丢掉吗?我遇到过加入某些抗生素摇菌时菌很容易沉淀的情况。
2楼2009-10-12 21:29:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
该温敏型质粒转其他菌在41℃摇的时候会出现这种情况吗?还有只是这种菌在41℃摇的时候会出现这种情况吗?楼主可以试试。
3楼2009-10-12 21:32:42
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asuo

我把转化子接到不加任何抗生素的培养基里,在41度还是那样,所以可以排除抗生素的影响;
    该转化子只有在41度摇得时候这样,别的情况都很正常。没有试过转入其它的菌,转进去了没有同源臂不能进行同源重组,质粒整合不到基因组上在41度丢失还是长不起来。
4楼2009-10-15 15:33:52
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1985228

铁虫 (小有名气)

求电转单增李斯特菌感受态细胞的制备


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
各位师兄师姐,谁那里有电转单增李斯特菌感受态细胞的制备方法啊?能不能指点下,不胜感激
我的邮箱是zhanghongjuan228@126.com
5楼2010-06-16 23:50:20
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1985228

铁虫 (小有名气)

求电转单增李斯特菌感受态细胞的制备

各位师兄师姐,谁那里有电转单增李斯特菌感受态细胞的制备方法啊?能不能指点下,不胜感激
我的邮箱是zhanghongjuan228@126.com
6楼2010-06-16 23:50:52
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huan121004

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也在做李斯特的电转,话说有的基因怎么转都转不进去?  电转后板上什么也不长
我要努力 成为 女王
7楼2018-01-12 10:06:19
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