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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 菌摇不起来为什么啊

最近我用质粒转化表达菌株BL21(DE3)和Rosetta(DE3),长出的单菌落摇16个小时左右,取200微升接到3mL LB培养基中摇四五个小时后看不出有变化,请问各位高人,这是为什么啊。按说200微升菌体量已经很大了,而且培养基用的也是与摇单菌落时相同的培养基。
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

silicare: 接到3mL LB培养基中 2011-06-25 09:11:30
200ul 怎么摇的呢
2楼2011-06-21 16:12:46
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5): 鼓励应助 2011-06-21 18:26:38
1、管子洗干净了么?如果管子之前摇过不同抗性的菌但是没有洗干净的话,残留的抗性可能会有影响啊;
2、楼主实验室有没有做噬菌体啊?如果在摇菌时间较短的的时候还可以看到有浑浊,但是约摇越清的话,可能是噬菌体污染,导致你的菌都被噬菌体裂解了。
祝楼主好运!
3楼2011-06-21 17:00:57
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-22 17:05:45
按楼主提供的情况,第一次菌体的培养情况正常,而第二次同样的操作和培养基却失败。
1实验室是很多仪器试剂共用,可以检查一下是否存在实验用品存在污染,比如说洗不干净,试剂污染等。
2检查摇床是否出现过不正常,比如说不小心关掉,温度不正常等。
3排除有同学无意破坏。

保留第一次培养菌体,再次进行培养扩增。
4楼2011-06-21 21:14:07
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super1998

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-25 09:11:38
1,检查抗生素是否加错,
2,看看是否摇床温度异常
3,加入3ml体系中,摇菌过夜,看不出变化,PCR验证一下也是有必要的,或许已经繁殖,但是量不大?
试试看,祝你好运
123
5楼2011-06-24 19:35:04
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cxbmh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3, EPI+1): 感谢交流 2011-07-17 20:18:42
zyx335588(金币+5): 谢谢 2011-07-31 00:43:08
引用回帖:
Originally posted by zyx335588 at 2011-06-21 15:37:17:
最近我用质粒转化表达菌株BL21(DE3)和Rosetta(DE3),长出的单菌落摇16个小时左右,取200微升接到3mL LB培养基中摇四五个小时后看不出有变化,请问各位高人,这是为什么啊。按说200微升菌体量已经很大了,而且 ...

首先要做的时:
1、枪头、菌管高温湿法灭菌(保证洁净度)
2、操作的时候,严格按无菌操作流程做(杜绝外来污染源)
3、可是尝试增大到6-7ml;同时培养时间适当延长,如过夜等
4、检测培养的条件:温度、转速
5、结果如果还是如上的话可能原因:
     a、你的菌株本来就是假阳性,
     b、扩繁菌株系老化,更换菌株
     c、如果不是菌株的问题,重新电击或热击。
6楼2011-07-16 21:53:13
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