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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌摇不起来为什么啊
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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 菌摇不起来为什么啊

最近我用质粒转化表达菌株BL21（DE3）和Rosetta（DE3），长出的单菌落摇16个小时左右，取200微升接到3mL LB培养基中摇四五个小时后看不出有变化，请问各位高人，这是为什么啊。按说200微升菌体量已经很大了，而且培养基用的也是与摇单菌落时相同的培养基。
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1楼 2011-06-21 15:37:17
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qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

silicare: 接到3mL LB培养基中 2011-06-25 09:11:30
200ul 怎么摇的呢
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2楼2011-06-21 16:12:46
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5): 鼓励应助 2011-06-21 18:26:38
1、管子洗干净了么？如果管子之前摇过不同抗性的菌但是没有洗干净的话，残留的抗性可能会有影响啊；
2、楼主实验室有没有做噬菌体啊？如果在摇菌时间较短的的时候还可以看到有浑浊，但是约摇越清的话，可能是噬菌体污染，导致你的菌都被噬菌体裂解了。
祝楼主好运！
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3楼2011-06-21 17:00:57
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-22 17:05:45
按楼主提供的情况，第一次菌体的培养情况正常，而第二次同样的操作和培养基却失败。
1实验室是很多仪器试剂共用，可以检查一下是否存在实验用品存在污染，比如说洗不干净，试剂污染等。
2检查摇床是否出现过不正常，比如说不小心关掉，温度不正常等。
3排除有同学无意破坏。

保留第一次培养菌体，再次进行培养扩增。
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4楼2011-06-21 21:14:07
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super1998

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-25 09:11:38
1，检查抗生素是否加错，
2，看看是否摇床温度异常
3，加入3ml体系中，摇菌过夜，看不出变化，PCR验证一下也是有必要的，或许已经繁殖，但是量不大？
试试看，祝你好运
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123
5楼2011-06-24 19:35:04
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cxbmh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3, EPI+1): 感谢交流 2011-07-17 20:18:42
zyx335588(金币+5): 谢谢 2011-07-31 00:43:08
引用回帖:
Originally posted by zyx335588 at 2011-06-21 15:37:17:
最近我用质粒转化表达菌株BL21（DE3）和Rosetta（DE3），长出的单菌落摇16个小时左右，取200微升接到3mL LB培养基中摇四五个小时后看不出有变化，请问各位高人，这是为什么啊。按说200微升菌体量已经很大了，而且 ...

首先要做的时：
1、枪头、菌管高温湿法灭菌（保证洁净度）
2、操作的时候，严格按无菌操作流程做（杜绝外来污染源）
3、可是尝试增大到6-7ml；同时培养时间适当延长，如过夜等
4、检测培养的条件：温度、转速
5、结果如果还是如上的话可能原因：
     a、你的菌株本来就是假阳性，
     b、扩繁菌株系老化，更换菌株
     c、如果不是菌株的问题，重新电击或热击。
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6楼2011-07-16 21:53:13
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