24小时热门版块排行榜    

查看: 1714  |  回复: 5

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

[求助] 双抗平板中长出了菌落,不知道是不是自己所要的重组菌 已有3人参与

自己做重组菌也做了好久了,一直没有做成功。目前在用的事PET32a质粒,这一次是目的基因和质粒酶切之后都没有做胶回收,用PCR产物纯化试剂盒纯化了下酒直接做了连接转化。筛选就是采用的氨苄和卡纳抗性筛选,在双抗平板上长出了菌落,初步P菌落PCR并没有得到想要的电泳条带。请问,如果不是我要的重组子,又会是什么呢?竟然还具有双抗性?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-18 08:49:37
摇菌后用菌液PCR看看,这个比菌落PCR效果好一点。我印象里pET系列的载体是单抗性的,怎么会用双抗啊!
2楼2014-03-17 23:18:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-03-17 23:18:23
摇菌后用菌液PCR看看,这个比菌落PCR效果好一点。我印象里pET系列的载体是单抗性的,怎么会用双抗啊!

目的基因和PET32a质粒重组连接了下,在双抗平板上就长出来了一些菌落。。
3楼2014-03-18 12:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

691806321

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌落PCR很不准确的,不确定因素太多。好多情况都是菌落PCR是阳性,酶切鉴定不是。建议挑几个菌落摇菌提质粒,酶切鉴定下,就算不是,也知道问题出在哪里,下次做时可以注意。此外,氨苄,卡纳抗性平板上长了,也不一定就是你要的重组菌,是杂菌的可能性也有。要具体看看菌落的形态。
4楼2014-03-18 14:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjjhhbbb

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很可能是杂菌,一般是菌落PCR鉴定是不是你要的目的基因,当然提质粒检测更准确
5楼2014-03-18 15:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jjjhhbbb at 2014-03-18 15:18:01
很可能是杂菌,一般是菌落PCR鉴定是不是你要的目的基因,当然提质粒检测更准确

哎  经导师鉴定,做错了。
6楼2014-03-18 18:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 无敌小莫 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见