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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序质粒提不出来
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 测序质粒提不出来

构建了一个质粒，转到大肠杆菌之后，挑单菌落活化再重新提质粒，酶切验证以后，发现大小是对的，就取了一部分菌液送去测序，结果测序公司说质粒提不出来，不清楚是怎么回事，有遇到类似情况的吗？
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1楼 2013-10-28 10:48:11
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1 2013-10-28 15:03:35
你自己提一遍，如果没问题就把菌液和提取的质粒同时给他，让他先提，还提不出来就用质粒测序。

还有一种可能就是测序公司不靠谱，换公司
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-10-28 14:53:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-28 14:53:31
你自己提一遍，如果没问题就把菌液和提取的质粒同时给他，让他先提，还提不出来就用质粒测序。

还有一种可能就是测序公司不靠谱，换公司

我自己提的浓度达不到测序公司的要求，他要求200ng/ul，我只能提到几十纳克。
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3楼2013-10-28 16:02:40
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bleach060452

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:32:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-10-28 16:02:40
我自己提的浓度达不到测序公司的要求，他要求200ng/ul，我只能提到几十纳克。...

那就有可能是你的质粒有问题了，在确定试剂和操作方法没问题的情况下再提一下，有可能是拷贝数低，有可能是其他问题~~

最直接的解决办法：想达到浓度，就多摇几管菌小提，最后洗脱是用一管的洗脱液量去洗脱多管，看一下浓度如何吧

或者做一下分区划线，筛选+活化一下
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岂能尽如人意，但求无愧我心
4楼2013-10-28 17:06:05
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-28 17:06:05
那就有可能是你的质粒有问题了，在确定试剂和操作方法没问题的情况下再提一下，有可能是拷贝数低，有可能是其他问题~~

最直接的解决办法：想达到浓度，就多摇几管菌小提，最后洗脱是用一管的洗脱液量去洗脱多管 ...

这种情况质粒会有什么问题呢？
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5楼2013-10-28 18:19:07
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bleach060452

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-10-28 18:19:07
这种情况质粒会有什么问题呢？...

老实说不知道，没研究过，也有可能是受体菌的问题啊~~
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岂能尽如人意，但求无愧我心
6楼2013-10-29 16:20:47
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-31 13:08:16
不用去找原因，测序公司很多都不靠谱的，这是我们遇到问题的首选。比如把你样品加错抗性摇菌了，也会告诉你提不出来。。。。直接让他从做一次就可以了，或者自己送质粒。质粒浓度，一般的公司要求50ng/ul就足够了，我测过20ng/ul。
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7楼2013-10-31 10:34:07
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