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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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orchid华仔

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒浓度很低 无法测序 求挽救措施

今天提取了质粒   电泳之后发现浓度很低,师兄说没有酶切,测序的必要,有没有什么挽救的办法?难道要重新摇菌吗?
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:11:42
你这个质粒测序是对质粒测序还是质粒上连接的目的基因,如果是目的基因你可以采用高保真的酶扩增后在送产物测序,但如果是这样一般你的质粒都是小提,那还不如直接摇菌后重新提呢!
生物化学与分子生物学
2楼2012-12-28 18:00:45
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普通回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+1, 感谢应助 2012-12-28 21:11:51
浓度很低是多低
你直接摇些菌送菌液去测序就是
也不麻烦
3楼2012-12-28 18:31:49
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+2, 谢谢提供方案 2012-12-28 21:12:02
质粒浓度很低,可以重新提,摇六七个小时感觉浑浊点了,加上一定量的氯霉素,这样再摇12到16个小时,可以提高质粒的拷贝数,提出来的浓度就高了。
4楼2012-12-28 19:04:15
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:12:08
质粒浓度很低,可以重新提,摇六七个小时感觉浑浊点了,加上一定量的氯霉素,这样再摇12到16个小时,可以提高质粒的拷贝数,提出来的浓度就高了。
5楼2012-12-28 19:04:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liudianlei at 2012-12-28 19:04:48
质粒浓度很低,可以重新提,摇六七个小时感觉浑浊点了,加上一定量的氯霉素,这样再摇12到16个小时,可以提高质粒的拷贝数,提出来的浓度就高了。

最近看了一下分子克隆,看到氯霉素这里,可以提高松弛型质粒的拷贝数,你觉得pET系列质粒算松弛型还是严谨型?pET载体在细胞内正常好像也就几十个拷贝吧?
生物资源交流QQ群:1044518333
6楼2012-12-28 19:21:12
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2012-12-28 21:12:19
你的质粒是PET系列的吗?我的也是这个系列的,浓度也不是很高,这个系列应该是松弛型的吧,我不加氯霉素提出来的浓度更低,你试试吧,你的质粒是具体是哪个?
7楼2012-12-28 19:37:19
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Jason_LuYZ

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒浓度低可能是由于你的质粒类型决定的,要是低拷贝数质粒建议多培养些细胞  提质粒 然后考虑浓缩一下质粒。

当然也可能是你培养时间不够,菌体量太少 ,提取过程丢失太多了。
Ialwaysbelivethattherewardsisparalledtoone'sdevotion~
8楼2012-12-28 22:53:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pET这类载体是表达用的,拷贝数本身就不如克隆载体来得高。不行的话你多摇些菌提质粒。测序所用的质粒浓度要求不是特别高的。
9楼2012-12-29 02:02:52
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议直接送菌液,把棘手的问题留给测序公司吧,如果你实验要用的话,就多裂解几管,然后过柱子的时候给浓缩一下
10楼2012-12-29 15:31:24
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