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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒浓度很低 无法测序 求挽救措施
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orchid华仔

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒浓度很低 无法测序 求挽救措施

今天提取了质粒   电泳之后发现浓度很低，师兄说没有酶切，测序的必要，有没有什么挽救的办法？难道要重新摇菌吗？
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做自己爱做的事
1楼 2012-12-28 17:47:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lidonghong

金虫 (正式写手)

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★
感谢参与，应助指数 +1
古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:11:42
你这个质粒测序是对质粒测序还是质粒上连接的目的基因，如果是目的基因你可以采用高保真的酶扩增后在送产物测序，但如果是这样一般你的质粒都是小提，那还不如直接摇菌后重新提呢！
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生物化学与分子生物学
2楼2012-12-28 18:00:45
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普通回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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古可ぷ: 金币+1, 感谢应助 2012-12-28 21:11:51
浓度很低是多低
你直接摇些菌送菌液去测序就是
也不麻烦
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3楼2012-12-28 18:31:49
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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古可ぷ: 金币+2, 谢谢提供方案 2012-12-28 21:12:02
质粒浓度很低，可以重新提，摇六七个小时感觉浑浊点了，加上一定量的氯霉素，这样再摇12到16个小时，可以提高质粒的拷贝数，提出来的浓度就高了。
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4楼2012-12-28 19:04:15
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:12:08
质粒浓度很低，可以重新提，摇六七个小时感觉浑浊点了，加上一定量的氯霉素，这样再摇12到16个小时，可以提高质粒的拷贝数，提出来的浓度就高了。
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5楼2012-12-28 19:04:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liudianlei at 2012-12-28 19:04:48
质粒浓度很低，可以重新提，摇六七个小时感觉浑浊点了，加上一定量的氯霉素，这样再摇12到16个小时，可以提高质粒的拷贝数，提出来的浓度就高了。

最近看了一下分子克隆，看到氯霉素这里，可以提高松弛型质粒的拷贝数，你觉得pET系列质粒算松弛型还是严谨型？pET载体在细胞内正常好像也就几十个拷贝吧？
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生物资源交流QQ群：1044518333
6楼2012-12-28 19:21:12
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2012-12-28 21:12:19
你的质粒是PET系列的吗？我的也是这个系列的，浓度也不是很高，这个系列应该是松弛型的吧，我不加氯霉素提出来的浓度更低，你试试吧，你的质粒是具体是哪个？
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7楼2012-12-28 19:37:19
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Jason_LuYZ

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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质粒浓度低可能是由于你的质粒类型决定的，要是低拷贝数质粒建议多培养些细胞  提质粒 然后考虑浓缩一下质粒。

当然也可能是你培养时间不够，菌体量太少 ，提取过程丢失太多了。
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Ialwaysbelivethattherewardsisparalledtoone'sdevotion~
8楼2012-12-28 22:53:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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pET这类载体是表达用的，拷贝数本身就不如克隆载体来得高。不行的话你多摇些菌提质粒。测序所用的质粒浓度要求不是特别高的。
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9楼2012-12-29 02:02:52
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议直接送菌液，把棘手的问题留给测序公司吧，如果你实验要用的话，就多裂解几管，然后过柱子的时候给浓缩一下
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10楼2012-12-29 15:31:24
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