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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】质粒浓度只有65ng/ul 能用来测序吗
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒浓度只有65ng/ul 能用来测序吗

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1楼2011-03-30 17:20:59
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
要上3730么？估计有点悬……可以试一试，一定得多送几个平行样
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2楼2011-03-30 17:59:29
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
浓度已经可以了。
听人说好像送质粒测序，公司会做转化再自己提质粒。
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3楼2011-03-30 18:39:42
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by gaoyang636 at 2011-03-30 17:59:29:
要上3730么？估计有点悬……可以试一试，一定得多送几个平行样

上3730是什么意思？我是提的质粒送去测序呀
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4楼2011-03-30 18:43:01
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
3730是测序仪的型号。

浓度够了，没问题。
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5楼2011-03-30 19:03:11
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
非常能，直接上样了
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6楼2011-03-30 20:15:21
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-03-30 20:15:21:
非常能，直接上样了

我是送到Takara 测序，谢谢啦
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7楼2011-03-30 21:35:42
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
额，我们自配溶液提质粒基本不用测浓度，都是直接送测序，或者你怕不行直接送菌液也行啊。
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8楼2011-03-30 23:21:19
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-03-30 23:21:19:
额，我们自配溶液提质粒基本不用测浓度，都是直接送测序，或者你怕不行直接送菌液也行啊。

我是做完菌液PCR，正确以后提了质粒，酶切也正确，条带也清晰，但不知怎么回事测的浓度很低，担心影响测序。你们不测浓度 怎么保证你们的质粒没问题呢
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9楼2011-03-30 23:28:57
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郝钊

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
我一直以为测序首先要PCR扩增，然后测序，难道是拿到质粒直接就可以测？
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10楼2011-03-30 23:51:14
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zgb1982

木虫 (正式写手)
哦！忘记说了，我们是先菌落（如果太小就再画线）PCR，挑有条带的摇菌液，提质粒30ul，2ul酶切验证。剩下给公司测序，自己也可以留点，不过还有菌落在。
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11楼2011-03-31 00:36:30
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yhmew

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
测序的话50ng/vl就够了，一般上反应要150ng,体系是可以调整的。送菌液也是可以的，会先帮你提质粒，然后测序.
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12楼2011-04-01 10:50:27
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yhmew at 2011-04-01 10:50:27:
测序的话50ng/vl就够了，一般上反应要150ng,体系是可以调整的。送菌液也是可以的，会先帮你提质粒，然后测序.

上反应跟测序有区别吗？ 我是送到TAKARA 不收菌液
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13楼2011-04-01 11:06:52
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yhmew

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-01 11:06:52:
上反应跟测序有区别吗？ 我是送到TAKARA 不收菌液

测序就是用引物和模版反应啊，和PCR差不多的，可因根据你的样品调整你的反应，一个反应150ng就够了，只是浓度低的话，体系要扩大，影响反应结果。不过只要>50ng/vl一般都是没有问题的。
最好还是送质粒吧，有些公司可以接收菌液的，TAKARA的不是很清楚...
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14楼2011-04-02 11:23:10
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
可以转化了再测序
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15楼2011-04-02 11:35:09
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rb

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
我最低曾经36ng/ul,直接上了3.5ul模板结果也是很漂亮的。
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16楼2011-04-03 01:13:20
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zzhwcz01

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得可以了，我问的一家测序公司说只要50ng/ul就可以了
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17楼2012-10-09 19:25:32
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