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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点 已有9人参与

用pMD18-T载体构建的质粒，菌液测序，结果不仅没测到PCR目的片段，连克隆位点的接头序列都测不到，为什么呢？很迷惑啊！
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1楼 2011-03-21 08:31:46
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sfb1020

金虫 (小有名气)
重测
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2楼2011-03-21 11:52:25
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
送测之前酶切了吗？
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一直向前！
3楼2011-03-21 12:45:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-21 15:05:53
载体可能自连了吧，酶里面可能有核酸外切酶污染
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4楼2011-03-21 12:47:20
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-03-21 11:52:25:
重测

重测了还是一样啊
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5楼2011-03-21 13:09:33
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-21 12:45:00:
送测之前酶切了吗？

没有，只是用PCR引物验证了一下
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-21 13:10:12
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-03-21 12:47:20:
载体可能自连了吧，酶里面可能有核酸外切酶污染

载体自连接头序列也不会丢失吧？
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7楼2011-03-21 13:11:09
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wzwhq

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-02 08:11:17
pcr鉴定不太可靠，还是酶切鉴定一下比较好，如果有目的带再送测序，如果没有，那就重连吧，T载体连接不难的，祝好运。
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8楼2011-03-21 13:50:38
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wzwhq at 2011-03-21 13:50:38:
pcr鉴定不太可靠，还是酶切鉴定一下比较好，如果有目的带再送测序，如果没有，那就重连吧，T载体连接不难的，祝好运。

请问为什么说PCR不太可靠啊？我也在做相关的工作
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-03-21 14:50:58
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walker2898

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌液对不对啊，按说这个载体挺好连的啊，测序也很好出结果啊。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-21 15:04:36
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