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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点 已有9人参与

用pMD18-T载体构建的质粒，菌液测序，结果不仅没测到PCR目的片段，连克隆位点的接头序列都测不到，为什么呢？很迷惑啊！
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1楼 2011-03-21 08:31:46
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
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Originally posted by sfb1020 at 2011-03-21 11:52:25:
重测

重测了还是一样啊
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5楼2011-03-21 13:09:33
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-21 12:45:00:
送测之前酶切了吗？

没有，只是用PCR引物验证了一下
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6楼2011-03-21 13:10:12
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-03-21 12:47:20:
载体可能自连了吧，酶里面可能有核酸外切酶污染

载体自连接头序列也不会丢失吧？
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7楼2011-03-21 13:11:09
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
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Originally posted by junjie2010 at 2011-03-21 19:32:03:
PCR鉴定不可靠的，一般情况下配合酶切验证，两者都通过后再送去测序，楼主说的情况很有可能是载体自连造成的。有时候PCR和酶切验证都不能验证结果是正确的，我就碰到这样的情况。没有什么重新做就是了，有时候重复 ...

序列比对可能确实是载体自连了，谢谢！
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13楼2011-03-23 08:58:20
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
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Originally posted by amilie030312 at 2011-03-31 13:49:22:
如果酶里面有核酸外切酶的污染那么片段末端就会损失掉几个碱基，然后再自连上之后测序就会发现载体序列有，但没目的序列而且还没有接头。

多谢指教！
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15楼2011-04-02 08:10:14
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