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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点 已有9人参与

用pMD18-T载体构建的质粒,菌液测序,结果不仅没测到PCR目的片段,连克隆位点的接头序列都测不到,为什么呢?很迷惑啊!
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by junjie2010 at 2011-03-21 19:32:03:
PCR鉴定不可靠的,一般情况下配合酶切验证,两者都通过后再送去测序,楼主说的情况很有可能是载体自连造成的。有时候PCR和酶切验证都不能验证结果是正确的,我就碰到这样的情况。没有什么重新做就是了,有时候重复 ...

序列比对可能确实是载体自连了,谢谢!
13楼2011-03-23 08:58:20
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查看全部 17 个回答

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

送测之前酶切了吗?
一直向前!
3楼2011-03-21 12:45:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-21 15:05:53
载体可能自连了吧,酶里面可能有核酸外切酶污染
4楼2011-03-21 12:47:20
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-03-21 11:52:25:
重测

重测了还是一样啊
5楼2011-03-21 13:09:33
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