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逸如风

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】核基因 PCR产物直接测序,结果出现单个位点套峰,是否需要做克隆测序

如题,核基因PCR产物直接测序,测序结果出现单个位点套峰,是否需要做克隆测序?我是要得到基因序列做分析,没有后续的实验。套峰位点两个碱基都很清楚,很有可能是杂合子,但是不知道能不能排除测序结果错误的可能性。求高手指点!!
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逸如风(金币+1):谢谢!就是说还是有测序误差的可能性咯? 2010-12-27 17:31:50
做下克隆吧,多测几个不同的克隆,看是否是测序误差,
不过如果是杂合子的话,不一定能保证能测两个有差异的克隆。
2楼2010-12-27 13:49:03
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amilie030312

金虫 (正式写手)


逸如风(金币+1):谢谢! 2010-12-27 17:32:08
你用的PCR的酶保真性不好,换个酶吧,你这PCR之后出现套峰了肯定是出现错配了
3楼2010-12-27 15:13:06
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


逸如风(金币+1):歇息 2010-12-29 09:39:02
那个密码子对应的氨基酸变了没?
4楼2010-12-27 15:18:22
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新虫 (初入文坛)


逸如风(金币+1):谢谢!没有钱呀。。。 2010-12-27 17:34:01
还是TA克隆比较保险
5楼2010-12-27 15:34:03
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逸如风

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-27 15:18:22:
那个密码子对应的氨基酸变了没?

套峰多在内含子区域,只有一个序列的一个位点是在编码区,兼并密码子
6楼2010-12-27 17:33:23
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逸如风

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-12-27 15:13:06:
你用的PCR的酶保真性不好,换个酶吧,你这PCR之后出现套峰了肯定是出现错配了

没有,只是一个位点的套峰,不是一段碱基序列的套峰
7楼2010-12-27 17:34:56
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 逸如风 at 2010-12-27 17:33:23:



套峰多在内含子区域,只有一个序列的一个位点是在编码区,兼并密码子

那就没啥问题了吧,编码区没事
8楼2010-12-27 18:08:12
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逸如风

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-27 13:49:03:
做下克隆吧,多测几个不同的克隆,看是否是测序误差,
不过如果是杂合子的话,不一定能保证能测两个有差异的克隆。

经验上测序是不是要挑取10个菌落?如果这样的话测序成本超出预期了。测序误差是可能存在的是吧?
9楼2010-12-29 09:41:40
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引用回帖:
Originally posted by 逸如风 at 2010-12-29 09:41:40:



经验上测序是不是要挑取10个菌落?如果这样的话测序成本超出预期了。测序误差是可能存在的是吧?

测序之前最好先鉴定是阳性转化子,然后多送几个去测序。
也不排除是测序的误差。
10楼2010-12-29 15:06:15
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