应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】核基因 PCR产物直接测序，结果出现单个位点套峰，是否需要做克隆测序
101/1返回列表
查看: 2297  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

逸如风

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】核基因 PCR产物直接测序，结果出现单个位点套峰，是否需要做克隆测序

如题，核基因PCR产物直接测序，测序结果出现单个位点套峰，是否需要做克隆测序？我是要得到基因序列做分析，没有后续的实验。套峰位点两个碱基都很清楚，很有可能是杂合子，但是不知道能不能排除测序结果错误的可能性。求高手指点！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-27 11:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
逸如风(金币+1):谢谢！就是说还是有测序误差的可能性咯？ 2010-12-27 17:31:50
做下克隆吧，多测几个不同的克隆，看是否是测序误差，
不过如果是杂合子的话，不一定能保证能测两个有差异的克隆。
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-27 13:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
逸如风(金币+1):谢谢！ 2010-12-27 17:32:08
你用的PCR的酶保真性不好，换个酶吧，你这PCR之后出现套峰了肯定是出现错配了
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-27 15:13:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
逸如风(金币+1):歇息 2010-12-29 09:39:02
那个密码子对应的氨基酸变了没？
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-27 15:18:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l123w456x789

新虫 (初入文坛)
逸如风(金币+1):谢谢！没有钱呀。。。 2010-12-27 17:34:01
还是TA克隆比较保险
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-27 15:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逸如风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-27 15:18:22:
那个密码子对应的氨基酸变了没？

套峰多在内含子区域，只有一个序列的一个位点是在编码区，兼并密码子
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-27 17:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逸如风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-12-27 15:13:06:
你用的PCR的酶保真性不好，换个酶吧，你这PCR之后出现套峰了肯定是出现错配了

没有，只是一个位点的套峰，不是一段碱基序列的套峰
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-27 17:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 逸如风 at 2010-12-27 17:33:23:



套峰多在内含子区域，只有一个序列的一个位点是在编码区，兼并密码子

那就没啥问题了吧，编码区没事
赞一下 回复此楼
8楼2010-12-27 18:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逸如风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-27 13:49:03:
做下克隆吧，多测几个不同的克隆，看是否是测序误差，
不过如果是杂合子的话，不一定能保证能测两个有差异的克隆。

经验上测序是不是要挑取10个菌落？如果这样的话测序成本超出预期了。测序误差是可能存在的是吧？
赞一下 回复此楼
9楼2010-12-29 09:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 逸如风 at 2010-12-29 09:41:40:



经验上测序是不是要挑取10个菌落？如果这样的话测序成本超出预期了。测序误差是可能存在的是吧？

测序之前最好先鉴定是阳性转化子，然后多送几个去测序。
也不排除是测序的误差。
赞一下 回复此楼
10楼2010-12-29 15:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 逸如风 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +6 tcxiaoxx 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:23 by edmund7
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭