应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1720  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急 已有7人参与

我们做的是对PCR产物进行克隆，用的是宝生物的克隆试剂盒D101A，里面用的是pMD18-T载体，如果要拿去测序的话，需要向测序公司提供什么？还有一个弱弱的问题，我看不太懂他的克隆位点。。。

[ Last edited by zhangrun0110 on 2010-9-16 at 14:41 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-16 14:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
具体看载体说明书，一般用的测序引物都是T7，T7ter，也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。
赞一下(1人) 回复此楼
金币是赌出来的
2楼2010-09-16 14:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2010-09-16 14:53:04:
具体看载体说明书，一般用的测序引物都是T7，T7ter，也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。

我们得到的是菌落，是不是还需要用液体LB培养基培养一下？培养基里是不是还得加抗生素？
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-16 15:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一笑35

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
说对了，是得继续用加抗生素的LB培养基培养一下，如果长势良好即可拿到测序公司测序。
赞一下(1人) 回复此楼
努力学习，充实自己！
4楼2010-09-16 15:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 一笑35 at 2010-09-16 15:06:29:
说对了，是得继续用加抗生素的LB培养基培养一下，如果长势良好即可拿到测序公司测序。

那我请问下长到什么程度就可以了呢？要用OD值确定吗？培养多长时间？
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-16 15:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivajie

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只需提供重组好的质粒
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-16 15:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmq682

金虫 (正式写手)
取摇过的菌液就可以了，克隆位点就是插入位点，就是那个酶切位点要连接上你的PCR序列
赞一下 回复此楼
7楼2010-09-16 16:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmq682

金虫 (正式写手)
你还是看点资料吧，过程要有好几步的
赞一下 回复此楼
8楼2010-09-16 16:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是果果

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
挑白色单菌落,用加amp的LB培养基培养,将菌液送去测序即可,注明你的载体类型,测序公司会用通用引物给你测序
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-09-16 16:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzw04

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 15:08:27:

那我请问下长到什么程度就可以了呢？要用OD值确定吗？培养多长时间？

长到肉眼能看到可以挑菌为止，然后挑菌，于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时，你能看见明显的浑浊，就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR，看转化是否成功
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-09-16 16:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangrun0110 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +12 努力奋斗112 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:33 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +9 梁富贵险中求 2026-04-04 9/450 2026-04-06 06:24 by houyaoxu
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-04 9/450 2026-04-06 00:06 by 永字号
[考研] 调剂 +7 不逢春 2026-04-05 8/400 2026-04-05 23:34 by 来看流星雨10
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +7 多多爱吃汉堡 2026-04-04 7/350 2026-04-05 19:47 by 福农资环_环境基
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 323求调剂（计算机视觉和大模型项目经历） +3 chaoxiicy 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:33 by zhq0425
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 302求调剂一志愿北航070300，本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 085410 一志愿211 22408分数359求调剂 +3 123456789qw 2026-03-31 4/200 2026-04-02 00:06 by 义文wang
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭