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happywoheni

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆测序结果分析问题

pcr产物拿去测序比对后，相似度达90%以上，与T载体连接转进大肠杆菌后，只有35%了，连引物的序列都不太对，这是什么原因？
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1楼 2011-07-30 12:48:11
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-30 16:37:59
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-07-30 23:37:24
T载体连接跟用什么引物没有关系的。
这种情况应该是有非特异性条带连接进去了，你挑取的正好是非特异性条带连接进去的转化子。解决办法是重新挑单菌落，先用菌落PCR验证下，阳性再送送去测序。
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2楼2011-07-30 14:31:35
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happywoheni

铁虫 (小有名气)
他们在拼接序列的时候，一个方向是对的，另一个方向差很多，我不知道是怎么回事，应该不是非特异性条带。我跑电泳时只有一条条带的。
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3楼2011-07-30 16:37:25
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happywoheni

铁虫 (小有名气)
我把另一个方向的序列弄成反向互补，结果正确。请问大家，这样的序列由我自己拼接的，可以用吗?在ncbi上提交的时候有问题吗？
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4楼2011-07-30 17:39:46
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