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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急已有7人参与

我们做的是对PCR产物进行克隆，用的是宝生物的克隆试剂盒D101A，里面用的是pMD18-T载体，如果要拿去测序的话，需要向测序公司提供什么？还有一个弱弱的问题，我看不太懂他的克隆位点。。。

[ Last edited by zhangrun0110 on 2010-9-16 at 14:41 ]
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1楼2010-09-16 14:12:08
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2010-09-16 14:53:04:
具体看载体说明书，一般用的测序引物都是T7，T7ter，也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。

我们得到的是菌落，是不是还需要用液体LB培养基培养一下？培养基里是不是还得加抗生素？
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3楼2010-09-16 15:04:06
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 一笑35 at 2010-09-16 15:06:29:
说对了，是得继续用加抗生素的LB培养基培养一下，如果长势良好即可拿到测序公司测序。

那我请问下长到什么程度就可以了呢？要用OD值确定吗？培养多长时间？
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5楼2010-09-16 15:08:27
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wzw04 at 2010-09-16 16:57:31:

长到肉眼能看到可以挑菌为止，然后挑菌，于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时，你能看见明显的浑浊，就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR，看转化是否成功

我做了菌液PCR，也有条带，而且还很亮，但不是我们想要的条带，这是怎么回事呢？
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11楼2010-09-16 17:19:31
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