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【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急
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zhangrun0110
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[交流]
【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急
已有7人参与
我们做的是对PCR产物进行克隆,用的是宝生物的克隆试剂盒D101A,里面用的是pMD18-T载体,如果要拿去测序的话,需要向测序公司提供什么?还有一个弱弱的问题,我看不太懂他的克隆位点。。。
[
Last edited by zhangrun0110 on 2010-9-16 at 14:41
]
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1楼
2010-09-16 14:12:08
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zhangrun0110
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引用回帖:
Originally posted by
wzw04
at 2010-09-16 16:57:31:
长到肉眼能看到可以挑菌为止,然后挑菌,于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时,你能看见明显的浑浊,就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR,看转化是否成功
我做了菌液PCR,也有条带,而且还很亮,但不是我们想要的条带,这是怎么回事呢?
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11楼
2010-09-16 17:19:31
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wjswj
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+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
具体看载体说明书,一般用的测序引物都是T7,T7ter,也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。
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2楼
2010-09-16 14:53:04
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zhangrun0110
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Originally posted by
wjswj
at 2010-09-16 14:53:04:
具体看载体说明书,一般用的测序引物都是T7,T7ter,也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。
我们得到的是菌落,是不是还需要用液体LB培养基培养一下?培养基里是不是还得加抗生素?
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3楼
2010-09-16 15:04:06
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一笑35
铁虫
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专业: 微生物与生化药学
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
说对了,是得继续用加抗生素的LB培养基培养一下,如果长势良好即可拿到测序公司测序。
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努力学习,充实自己!
4楼
2010-09-16 15:06:29
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