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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急已有7人参与

我们做的是对PCR产物进行克隆,用的是宝生物的克隆试剂盒D101A,里面用的是pMD18-T载体,如果要拿去测序的话,需要向测序公司提供什么?还有一个弱弱的问题,我看不太懂他的克隆位点。。。

[ Last edited by zhangrun0110 on 2010-9-16 at 14:41 ]
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)


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Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 15:08:27:

那我请问下长到什么程度就可以了呢?要用OD值确定吗?培养多长时间?

长到肉眼能看到可以挑菌为止,然后挑菌,于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时,你能看见明显的浑浊,就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR,看转化是否成功
10楼2010-09-16 16:57:31
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)


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Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 17:19:31:

我做了菌液PCR,也有条带,而且还很亮,但不是我们想要的条带,这是怎么回事呢?

你在转化之前,琼脂糖检测PCR产物时,是否看到了目的条带。如果有切胶回收转化应该没有问题。我之前遇到这样的情况是因为我做菌液PCR的引物被污染了,其实转化就没有成功,但也P出带了,自然不是我们所需要的。
13楼2010-09-17 17:13:00
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