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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急已有7人参与

我们做的是对PCR产物进行克隆,用的是宝生物的克隆试剂盒D101A,里面用的是pMD18-T载体,如果要拿去测序的话,需要向测序公司提供什么?还有一个弱弱的问题,我看不太懂他的克隆位点。。。

[ Last edited by zhangrun0110 on 2010-9-16 at 14:41 ]
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 17:19:31:

我做了菌液PCR,也有条带,而且还很亮,但不是我们想要的条带,这是怎么回事呢?

你在转化之前,琼脂糖检测PCR产物时,是否看到了目的条带。如果有切胶回收转化应该没有问题。我之前遇到这样的情况是因为我做菌液PCR的引物被污染了,其实转化就没有成功,但也P出带了,自然不是我们所需要的。
13楼2010-09-17 17:13:00
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
具体看载体说明书,一般用的测序引物都是T7,T7ter,也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。
金币是赌出来的
2楼2010-09-16 14:53:04
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2010-09-16 14:53:04:
具体看载体说明书,一般用的测序引物都是T7,T7ter,也不用你提供。最好提供活菌或者纯化好的质粒。

我们得到的是菌落,是不是还需要用液体LB培养基培养一下?培养基里是不是还得加抗生素?
3楼2010-09-16 15:04:06
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一笑35

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
说对了,是得继续用加抗生素的LB培养基培养一下,如果长势良好即可拿到测序公司测序。
努力学习,充实自己!
4楼2010-09-16 15:06:29
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