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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆后DNA片段测序 急
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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wzw04 at 2010-09-16 16:57:31:

长到肉眼能看到可以挑菌为止，然后挑菌，于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时，你能看见明显的浑浊，就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR，看转化是否成功

我做了菌液PCR，也有条带，而且还很亮，但不是我们想要的条带，这是怎么回事呢？
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11楼2010-09-16 17:19:31
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一笑35

铁虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 15:08:27:

那我请问下长到什么程度就可以了呢？要用OD值确定吗？培养多长时间？

不用检测，只要肉眼看到长菌就行，一般摇五六个小时就可以了，而且送到测序公司他们还需要继续摇。
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努力学习，充实自己！
12楼2010-09-16 17:26:26
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 17:19:31:

我做了菌液PCR，也有条带，而且还很亮，但不是我们想要的条带，这是怎么回事呢？

你在转化之前，琼脂糖检测PCR产物时，是否看到了目的条带。如果有切胶回收转化应该没有问题。我之前遇到这样的情况是因为我做菌液PCR的引物被污染了，其实转化就没有成功，但也P出带了，自然不是我们所需要的。
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13楼2010-09-17 17:13:00
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