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zhangrun0110

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wzw04 at 2010-09-16 16:57:31:

长到肉眼能看到可以挑菌为止,然后挑菌,于加入抗生素的LB液体培养基中摇床培养。250rpm摇个3小时,你能看见明显的浑浊,就可以将菌液送去测序了。测序之前你还可以做个菌液PCR,看转化是否成功

我做了菌液PCR,也有条带,而且还很亮,但不是我们想要的条带,这是怎么回事呢?
11楼2010-09-16 17:19:31
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一笑35

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 15:08:27:

那我请问下长到什么程度就可以了呢?要用OD值确定吗?培养多长时间?

不用检测,只要肉眼看到长菌就行,一般摇五六个小时就可以了,而且送到测序公司他们还需要继续摇。
努力学习,充实自己!
12楼2010-09-16 17:26:26
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangrun0110 at 2010-09-16 17:19:31:

我做了菌液PCR,也有条带,而且还很亮,但不是我们想要的条带,这是怎么回事呢?

你在转化之前,琼脂糖检测PCR产物时,是否看到了目的条带。如果有切胶回收转化应该没有问题。我之前遇到这样的情况是因为我做菌液PCR的引物被污染了,其实转化就没有成功,但也P出带了,自然不是我们所需要的。
13楼2010-09-17 17:13:00
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