应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
172/2返回列表上一页12
查看: 2484  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

junjie2010

铜虫 (小有名气)
PCR鉴定不可靠的，一般情况下配合酶切验证，两者都通过后再送去测序，楼主说的情况很有可能是载体自连造成的。有时候PCR和酶切验证都不能验证结果是正确的，我就碰到这样的情况。没有什么重新做就是了，有时候重复是最好的答案！
赞一下 回复此楼
11楼2011-03-21 19:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzwhq

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by -超越beyond at 2011-03-21 14:50:58:
请问为什么说PCR不太可靠啊？我也在做相关的工作

因为PCR会有假阳性的情况出现啊。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-03-22 09:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by junjie2010 at 2011-03-21 19:32:03:
PCR鉴定不可靠的，一般情况下配合酶切验证，两者都通过后再送去测序，楼主说的情况很有可能是载体自连造成的。有时候PCR和酶切验证都不能验证结果是正确的，我就碰到这样的情况。没有什么重新做就是了，有时候重复 ...

序列比对可能确实是载体自连了，谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2011-03-23 08:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-02 08:11:55
引用回帖:
Originally posted by 鸟瞰世界 at 2011-03-21 13:11:09:
载体自连接头序列也不会丢失吧？

如果酶里面有核酸外切酶的污染那么片段末端就会损失掉几个碱基，然后再自连上之后测序就会发现载体序列有，但没目的序列而且还没有接头。
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2011-03-31 13:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-03-31 13:49:22:
如果酶里面有核酸外切酶的污染那么片段末端就会损失掉几个碱基，然后再自连上之后测序就会发现载体序列有，但没目的序列而且还没有接头。

多谢指教！
回复此楼
15楼2011-04-02 08:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mnswangjian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR筛选是最基本的方法。我用载体（pUC19）上的测序引物M13R分别与克隆上下游引物做双PCR筛选。只要克隆上去就有带。根据长度位置可可确定插入拷贝数、方向。还能排除假阳性。挺好的。建议试一下。mnswangjian
赞一下 回复此楼
16楼2013-01-23 22:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

琼Echo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我想说你们出现过PCR检测有目的片段、酶切同样能切开，但测序时却显示检测不到信号呢？
赞一下 回复此楼
恋着拟南芥的菇凉
17楼2013-07-16 11:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 鸟瞰世界 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:36 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 14/700 2026-08-30 17:01 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭