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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点 已有9人参与

用pMD18-T载体构建的质粒，菌液测序，结果不仅没测到PCR目的片段，连克隆位点的接头序列都测不到，为什么呢？很迷惑啊！
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1楼 2011-03-21 08:31:46
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mnswangjian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR筛选是最基本的方法。我用载体（pUC19）上的测序引物M13R分别与克隆上下游引物做双PCR筛选。只要克隆上去就有带。根据长度位置可可确定插入拷贝数、方向。还能排除假阳性。挺好的。建议试一下。mnswangjian
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16楼2013-01-23 22:06:43
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
送测之前酶切了吗？
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一直向前！
3楼2011-03-21 12:45:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-21 15:05:53
载体可能自连了吧，酶里面可能有核酸外切酶污染
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4楼2011-03-21 12:47:20
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-03-21 11:52:25:
重测

重测了还是一样啊
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5楼2011-03-21 13:09:33
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