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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点 已有9人参与

用pMD18-T载体构建的质粒,菌液测序,结果不仅没测到PCR目的片段,连克隆位点的接头序列都测不到,为什么呢?很迷惑啊!
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mnswangjian

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR筛选是最基本的方法。我用载体(pUC19)上的测序引物M13R分别与克隆上下游引物做双PCR筛选。只要克隆上去就有带。根据长度位置可可确定插入拷贝数、方向。还能排除假阳性。挺好的。建议试一下。mnswangjian
16楼2013-01-23 22:06:43
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查看全部 17 个回答

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

送测之前酶切了吗?
一直向前!
3楼2011-03-21 12:45:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-21 15:05:53
载体可能自连了吧,酶里面可能有核酸外切酶污染
4楼2011-03-21 12:47:20
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鸟瞰世界

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-03-21 11:52:25:
重测

重测了还是一样啊
5楼2011-03-21 13:09:33
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