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orchid华仔

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒浓度很低 无法测序 求挽救措施

今天提取了质粒   电泳之后发现浓度很低,师兄说没有酶切,测序的必要,有没有什么挽救的办法?难道要重新摇菌吗?
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做自己爱做的事
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+2, 谢谢提供方案 2012-12-28 21:12:02
质粒浓度很低,可以重新提,摇六七个小时感觉浑浊点了,加上一定量的氯霉素,这样再摇12到16个小时,可以提高质粒的拷贝数,提出来的浓度就高了。
4楼2012-12-28 19:04:15
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:11:42
你这个质粒测序是对质粒测序还是质粒上连接的目的基因,如果是目的基因你可以采用高保真的酶扩增后在送产物测序,但如果是这样一般你的质粒都是小提,那还不如直接摇菌后重新提呢!
生物化学与分子生物学
2楼2012-12-28 18:00:45
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
古可ぷ: 金币+1, 感谢应助 2012-12-28 21:11:51
浓度很低是多低
你直接摇些菌送菌液去测序就是
也不麻烦
3楼2012-12-28 18:31:49
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2012-12-28 21:12:08
质粒浓度很低,可以重新提,摇六七个小时感觉浑浊点了,加上一定量的氯霉素,这样再摇12到16个小时,可以提高质粒的拷贝数,提出来的浓度就高了。
5楼2012-12-28 19:04:48
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