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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数 已有6人参与

请问各位,有谁知道pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数是多还是少,我用pET-28a做转化但从转化子中总是提不出质粒.谢谢
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
刚才我说错了,的确是低拷贝质粒,主要是我平时用的很多,没有提取问题。你稍微摇时间长一点,12小时左右吧。1ml菌提的质粒足够做克隆用的了。

[ Last edited by winter_gates on 2010-4-28 at 17:08 ]
For my life!
2楼2010-04-28 16:45:01
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liyong1981

金虫 (正式写手)


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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
PET载体都是低拷贝的载体,建议你加大菌量,菌液浑浊了么?如果浑浊了就应该提得到啊,即使量不多,莫非有噬菌体作祟?
3楼2010-04-28 16:54:11
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jackiechan

木虫 (小有名气)

已经有点发白了,很浑浊了,我加大菌量试试,谢谢
4楼2010-04-28 21:07:55
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jackiechan

木虫 (小有名气)

我从BL21里提过pet28a,效果很好,难道pet28a在k12与bl21中拷贝数不一样吗
5楼2010-04-28 21:09:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)


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lstt09nk(金币+1): 2010-04-29 15:36
哈哈,你说多了~BL21DE3是高效表达pET载体的菌株,能利用T7启动子高效表达,有的菌株,就不会得到很多质粒和蛋白,你最好看一下你的菌株的基因型,希望对你有帮助
6楼2010-04-29 10:20:07
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


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呵呵,提取出一点后转化到常用的top10等克隆宿主中,这下再大提。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2010-04-29 10:39:23
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jackiechan

木虫 (小有名气)

谢谢,我有点不明白,质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗,拷贝数低可能表达强吗,
8楼2010-04-29 12:50:16
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liyong1981

金虫 (正式写手)



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可以啊,关键是看宿主菌啊~
9楼2010-04-29 16:43:25
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-04-29 12:50:16:
谢谢,我有点不明白,质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗,拷贝数低可能表达强吗,

怎么说能有关系,但不是绝对关系,只要你的启动子足够强,不需要很多的拷贝数的。
For my life!
10楼2010-05-03 10:52:29
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