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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数已有6人参与

请问各位，有谁知道pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数是多还是少，我用pET-28a做转化但从转化子中总是提不出质粒.谢谢
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1楼2010-04-28 16:16:13
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
刚才我说错了，的确是低拷贝质粒，主要是我平时用的很多，没有提取问题。你稍微摇时间长一点，12小时左右吧。1ml菌提的质粒足够做克隆用的了。

[ Last edited by winter_gates on 2010-4-28 at 17:08 ]
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For my life！
2楼2010-04-28 16:45:01
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liyong1981

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
PET载体都是低拷贝的载体，建议你加大菌量，菌液浑浊了么？如果浑浊了就应该提得到啊，即使量不多，莫非有噬菌体作祟？
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3楼2010-04-28 16:54:11
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jackiechan

木虫 (小有名气)
已经有点发白了，很浑浊了,我加大菌量试试，谢谢
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4楼2010-04-28 21:07:55
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jackiechan

木虫 (小有名气)
我从BL21里提过pet28a，效果很好，难道pet28a在k12与bl21中拷贝数不一样吗
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5楼2010-04-28 21:09:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1): 2010-04-29 15:36
哈哈，你说多了～BL21DE3是高效表达pET载体的菌株，能利用T7启动子高效表达，有的菌株，就不会得到很多质粒和蛋白，你最好看一下你的菌株的基因型，希望对你有帮助
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6楼2010-04-29 10:20:07
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
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呵呵，提取出一点后转化到常用的top10等克隆宿主中，这下再大提。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2010-04-29 10:39:23
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jackiechan

木虫 (小有名气)
谢谢，我有点不明白，质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗，拷贝数低可能表达强吗,
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8楼2010-04-29 12:50:16
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liyong1981

金虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以啊，关键是看宿主菌啊～
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9楼2010-04-29 16:43:25
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-04-29 12:50:16:
谢谢，我有点不明白，质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗，拷贝数低可能表达强吗,

怎么说能有关系，但不是绝对关系，只要你的启动子足够强，不需要很多的拷贝数的。
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For my life！
10楼2010-05-03 10:52:29
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