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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数 已有6人参与

请问各位,有谁知道pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数是多还是少,我用pET-28a做转化但从转化子中总是提不出质粒.谢谢
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liyong1981

金虫 (正式写手)


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lstt09nk(金币+1): 2010-04-29 15:36
哈哈,你说多了~BL21DE3是高效表达pET载体的菌株,能利用T7启动子高效表达,有的菌株,就不会得到很多质粒和蛋白,你最好看一下你的菌株的基因型,希望对你有帮助
6楼2010-04-29 10:20:07
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
刚才我说错了,的确是低拷贝质粒,主要是我平时用的很多,没有提取问题。你稍微摇时间长一点,12小时左右吧。1ml菌提的质粒足够做克隆用的了。

[ Last edited by winter_gates on 2010-4-28 at 17:08 ]
For my life!
2楼2010-04-28 16:45:01
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liyong1981

金虫 (正式写手)


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amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
PET载体都是低拷贝的载体,建议你加大菌量,菌液浑浊了么?如果浑浊了就应该提得到啊,即使量不多,莫非有噬菌体作祟?
3楼2010-04-28 16:54:11
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jackiechan

木虫 (小有名气)

已经有点发白了,很浑浊了,我加大菌量试试,谢谢
4楼2010-04-28 21:07:55
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