24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3147  |  回复: 11

jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数已有6人参与

请问各位,有谁知道pET-28a在大肠杆菌K-12中拷贝数是多还是少,我用pET-28a做转化但从转化子中总是提不出质粒.谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
刚才我说错了,的确是低拷贝质粒,主要是我平时用的很多,没有提取问题。你稍微摇时间长一点,12小时左右吧。1ml菌提的质粒足够做克隆用的了。

[ Last edited by winter_gates on 2010-4-28 at 17:08 ]
For my life!
2楼2010-04-28 16:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-04-28 21:16
PET载体都是低拷贝的载体,建议你加大菌量,菌液浑浊了么?如果浑浊了就应该提得到啊,即使量不多,莫非有噬菌体作祟?
3楼2010-04-28 16:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

已经有点发白了,很浑浊了,我加大菌量试试,谢谢
4楼2010-04-28 21:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

我从BL21里提过pet28a,效果很好,难道pet28a在k12与bl21中拷贝数不一样吗
5楼2010-04-28 21:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 2010-04-29 15:36
哈哈,你说多了~BL21DE3是高效表达pET载体的菌株,能利用T7启动子高效表达,有的菌株,就不会得到很多质粒和蛋白,你最好看一下你的菌株的基因型,希望对你有帮助
6楼2010-04-29 10:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,提取出一点后转化到常用的top10等克隆宿主中,这下再大提。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2010-04-29 10:39:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

谢谢,我有点不明白,质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗,拷贝数低可能表达强吗,
8楼2010-04-29 12:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以啊,关键是看宿主菌啊~
9楼2010-04-29 16:43:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-04-29 12:50:16:
谢谢,我有点不明白,质粒拷贝数和基因表达强弱有必然关系吗,拷贝数低可能表达强吗,

怎么说能有关系,但不是绝对关系,只要你的启动子足够强,不需要很多的拷贝数的。
For my life!
10楼2010-05-03 10:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jackiechan 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见