应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我想将pcr片段转入大肠杆菌内
201/1返回列表
查看: 4463  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 我想将pcr片段转入大肠杆菌内

我想将PCR片段转入大肠杆菌内，其他人都用的电击转化，我这做不了电击转化，化转可以吗？有这么做过的没呀？我转了两次，都没成功，有成功的没？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-27 01:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

花生剥了壳

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-29 10:29:24
看来楼主是刚刚接触分子生物学，PCR转化到大肠杆菌是不可能随着菌的扩增而扩增的，它进入菌体后会被降解掉，因为它没有复制的相关元件！可以把pcr产物连接T载体之后转化到（可以热击也可以电击）大肠杆菌感受态中，才会出现相关的复制子。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-03-27 15:46:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢呀 2012-03-27 09:16:47
先连T载体，氯化钙法就能转大肠杆菌，不需要电击转化。
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-27 07:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hls85915

荣誉版主 (文坛精英)
不一定电击化
回复此楼
4楼2012-03-27 08:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+1, 能，能，这个我有办法，就是不知道该咋转进去呀，不用电击可以吗 2012-03-27 09:13:54
PCR片段直接转入大肠杆菌中能表达吗？
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-27 08:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5 2012-04-10 13:54:26
1.要是制备感受态细胞，然后转化到细菌体内
2.通过基因枪试试呢
3.PEG介导应该也可以。。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-27 09:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转入到大肠杆菌中打算怎么弄啊。。。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-27 09:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elon_ma

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2012-03-27 09:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgspider

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+4 2012-04-10 13:54:37
买感受态细胞和T载体
1. 连接，将你的PCR片段连接到载体上；
2. 带有目的片段的载体转入感受态细胞；
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-27 09:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱沈泉

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 我这必须转片段呀，不能用载体呢，化转靠谱不？ 2012-03-27 18:34:02
使用T载体，然后冰浴30min  42度热击45s  再冰浴3min  加液体培养基  37度摇菌1h  涂板  长12h  挑菌划线  再培养8h  菌落PCR 验证
赞一下 回复此楼
11楼2012-03-27 16:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

光树林

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
理论我都学习过。。。呵呵，就是没实践过
赞一下 回复此楼
13楼2012-03-27 17:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转大肠用普通热击42℃转化完全够了，可以不用电转化的。
赞一下 回复此楼
14楼2012-03-29 09:21:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做过大肠杆菌转化，用的是氯化钙处理的感受态细胞，实验的成败关键在于感受态细胞，细胞给力，结果就很好。
赞一下 回复此楼
15楼2012-03-29 09:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingyabin

金虫 (小有名气)
也来学学，虚心聆听
赞一下 回复此楼
16楼2012-03-29 10:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胖胖二妮子

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连接到载体上，再用CaCl2感受态热激转化，42度90秒，冰浴两分钟
赞一下 回复此楼
17楼2012-03-29 10:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原野漫漫

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2012-03-29 21:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢铮

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把PCR片段连到质粒上，因为质粒才能在细菌体内自主复制。
然后用冷钙法将质粒转化到感受态细胞内。
感受态可以自己做，也可以买到。
赞一下 回复此楼
19楼2012-03-30 13:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+1, 几乎所有人都会质疑啊，呵呵，我自有办法不让片段被降解的 2012-03-30 15:07:59
必须将pcr产物连接至相应载体才可以转化，这样才能在宿主菌里面复制目的片段。。。。。
楼主，你的版主是如何当起来的。。。。质疑。。。
赞一下 回复此楼
20楼2012-03-30 14:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
albert75283楼
2012-03-27 08:01   回复  
zhang731112楼
2012-03-27 16:56   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhang8826857 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:36 by MWRYsWbJw4DE
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 11:31 by MWRYsWbJw4DE
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:26 by MWRYsWbJw4DE
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:26 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭