应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于连接转化 急需！
51/1返回列表
查看: 1085  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dizi1987

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于连接转化 急需！ 已有3人参与

我做了两次连接转化，情况如下
目的基因与质粒载体连接后 ，电击转化大肠杆菌，用抗生素筛选培养一段时间后 ，可见单菌落。挑取单菌落培养 提质粒，电泳检测，无条带。用质粒扩PCR，可见目的条带。这是怎么回事？希望高手指点，下一步是准备将重组质粒转入真核细胞进行表达。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-08 16:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:48:59
可能质粒提取的量太少了，虽然电泳看不到，但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以：尝试菌落PCR；
既然PCR出来目的条带，就送去测序看看是不是你的插入片段吧，
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-08 18:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-08 18:43:55:
可能质粒提取的量太少了，虽然电泳看不到，但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以：尝试菌落PCR；
既然PCR出来目的条带，就送去测序看看是不是你的插入片段吧，

呵呵 谢谢！ 还想请教一下 ，重组质粒电击转化酵母时 ，是否一定要线性化？
如果是的话，就需要大量的重组质粒进行单酶切并回收，这样的话，岂不是又要重新连接转化大肠杆菌，直到能提取出足够量的重组质粒？
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-09 10:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:49:10
最好线性化，增加重组的几率，但是呢，线性化使得转化效率下降，因为空间位阻增大了撒，电转好些，什么氯化锂的啥，不要做了~
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-12-09 10:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-12-09 10:32:16:
最好线性化，增加重组的几率，但是呢，线性化使得转化效率下降，因为空间位阻增大了撒，电转好些，什么氯化锂的啥，不要做了~

O(∩_∩)O~ 谢谢哈
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-09 11:17:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dizi1987 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭