24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1098  |  回复: 4

dizi1987

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于连接转化 急需! 已有3人参与

我做了两次连接转化,情况如下
目的基因与质粒载体连接后 ,电击转化大肠杆菌,用抗生素筛选培养一段时间后 ,可见单菌落。挑取单菌落培养 提质粒,电泳检测,无条带。用质粒扩PCR,可见目的条带。这是怎么回事?希望高手指点,下一步是准备将重组质粒转入真核细胞进行表达。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:48:59
可能质粒提取的量太少了,虽然电泳看不到,但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以:尝试菌落PCR;
既然PCR出来目的条带,就送去测序看看是不是你的插入片段吧,
2楼2010-12-08 18:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-08 18:43:55:
可能质粒提取的量太少了,虽然电泳看不到,但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以:尝试菌落PCR;
既然PCR出来目的条带,就送去测序看看是不是你的插入片段吧,

呵呵 谢谢! 还想请教一下 ,重组质粒电击转化酵母时 ,是否一定要线性化?
如果是的话,就需要大量的重组质粒进行单酶切并回收,这样的话,岂不是又要重新连接转化大肠杆菌,直到能提取出足够量的重组质粒?
3楼2010-12-09 10:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:49:10
最好线性化,增加重组的几率,但是呢,线性化使得转化效率下降,因为空间位阻增大了撒,电转好些,什么氯化锂的啥,不要做了~
4楼2010-12-09 10:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-12-09 10:32:16:
最好线性化,增加重组的几率,但是呢,线性化使得转化效率下降,因为空间位阻增大了撒,电转好些,什么氯化锂的啥,不要做了~

O(∩_∩)O~ 谢谢哈
5楼2010-12-09 11:17:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dizi1987 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +10 Naiko 2026-04-04 10/500 2026-04-05 09:40 by sam3303
[考研] 283求调剂 +10 A child 2026-04-04 10/500 2026-04-05 08:22 by qlm5820
[考研] 285求调剂 +11 哦呦呼o 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:15 by 544594351
[考研] 求调剂 +7 xzghyuj 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:25 by oooqiao
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +3 cs0106 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:10 by lbsjt
[考研] 材料专硕306英一数二 +8 z1z2z3879 2026-03-31 8/400 2026-04-04 22:08 by hemengdong
[考研] 环境285分,过六级,求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +11 努力奋斗112 2026-04-04 11/550 2026-04-04 20:51 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 交通运输考试264分求工科调剂 +4 jike777 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:53 by zllcz
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突, 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突,
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
信息提示
请填处理意见