24小时热门版块排行榜    

查看: 1271  |  回复: 4

dizi1987

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于连接转化 急需! 已有3人参与

我做了两次连接转化,情况如下
目的基因与质粒载体连接后 ,电击转化大肠杆菌,用抗生素筛选培养一段时间后 ,可见单菌落。挑取单菌落培养 提质粒,电泳检测,无条带。用质粒扩PCR,可见目的条带。这是怎么回事?希望高手指点,下一步是准备将重组质粒转入真核细胞进行表达。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:48:59
可能质粒提取的量太少了,虽然电泳看不到,但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以:尝试菌落PCR;
既然PCR出来目的条带,就送去测序看看是不是你的插入片段吧,
2楼2010-12-08 18:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-08 18:43:55:
可能质粒提取的量太少了,虽然电泳看不到,但是PCR只需要微量模板就能扩增出来的
可以:尝试菌落PCR;
既然PCR出来目的条带,就送去测序看看是不是你的插入片段吧,

呵呵 谢谢! 还想请教一下 ,重组质粒电击转化酵母时 ,是否一定要线性化?
如果是的话,就需要大量的重组质粒进行单酶切并回收,这样的话,岂不是又要重新连接转化大肠杆菌,直到能提取出足够量的重组质粒?
3楼2010-12-09 10:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:49:10
最好线性化,增加重组的几率,但是呢,线性化使得转化效率下降,因为空间位阻增大了撒,电转好些,什么氯化锂的啥,不要做了~
4楼2010-12-09 10:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizi1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-12-09 10:32:16:
最好线性化,增加重组的几率,但是呢,线性化使得转化效率下降,因为空间位阻增大了撒,电转好些,什么氯化锂的啥,不要做了~

O(∩_∩)O~ 谢谢哈
5楼2010-12-09 11:17:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dizi1987 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见