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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】关于转化 急需解决
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dizi1987

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于转化 急需解决 已有5人参与

转化酵母时，质粒需先线性化。那么是先回收再单酶切，还是先酶切再回收好一些呢？两种方法对电击转化有无影响？急需解决
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1楼 2010-09-04 13:30:40
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2):学习交流 2010-09-04 17:19:11
没有做过酵母转化，不过我的理解是，酶切的时候肯定要加入buffer和酶，那么就不纯了，然后做个胶回收纯化一下，更好。
所以，我的理解，不管怎么样，酶切之后，都是要回收的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2010-09-04 14:45:39
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1):学习交流 2010-09-04 17:19:23
常识化程序：先酶切，再回收。
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3楼2010-09-04 14:54:44
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dizi1987

新虫 (小有名气)
多谢楼上两位啦
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4楼2010-09-04 17:31:16
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j2

木虫 (正式写手)
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-04 23:07:43
提取质粒的后几步就相当于纯化回收了，酶切后需要纯化回收的，一是出去酶，二是出去酶切体系里的盐离子。盐离子多了会影响电转化效率，过高会出现爆管
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-09-04 21:56:21
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dingnan8822

铁杆木虫 (正式写手)
★
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提的质粒又不是PCR产物，不需要特意的回收
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6楼2010-09-06 23:04:16
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