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dizi1987

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于转化 急需解决 已有5人参与

转化酵母时,质粒需先线性化。那么是先回收再单酶切,还是先酶切再回收好一些呢?两种方法对电击转化有无影响?急需解决
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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1949stone(金币+2):学习交流 2010-09-04 17:19:11
没有做过酵母转化,不过我的理解是,酶切的时候肯定要加入buffer和酶,那么就不纯了,然后做个胶回收纯化一下,更好。
所以,我的理解,不管怎么样,酶切之后,都是要回收的。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2010-09-04 14:45:39
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

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1949stone(金币+1):学习交流 2010-09-04 17:19:23
常识化程序:先酶切,再回收。
3楼2010-09-04 14:54:44
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dizi1987

新虫 (小有名气)

多谢楼上两位啦
4楼2010-09-04 17:31:16
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j2

木虫 (正式写手)

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scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-04 23:07:43
提取质粒的后几步就相当于纯化回收了,酶切后需要纯化回收的,一是出去酶,二是出去酶切体系里的盐离子。盐离子多了会影响电转化效率,过高会出现爆管
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-09-04 21:56:21
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dingnan8822

铁杆木虫 (正式写手)


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提的质粒又不是PCR产物,不需要特意的回收
6楼2010-09-06 23:04:16
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