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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒PCR用来验证阳性的可靠性
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mine8008

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒PCR用来验证阳性的可靠性

质粒PCR用来验证阳性的可靠性为什么低？为什么酶切切不开，可是质粒PCR却能看见目的带？
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1楼 2012-10-09 10:50:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

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★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:51:03
PCR检测只是为下一步酶切奠定基础，一般酶切选则的是PCR验证正常的质粒，PCR有结果但是切不开是很正常的，如果你的内切酶选择没有问题的话，那就是你PCR是假阳性的！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-10-09 11:10:02
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hofo336699

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒PCR可靠性是很高的。
当然，假阳性除外
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懒虫啊！
5楼2012-10-09 11:35:52
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒PCR可靠性是很高的。
可以切开。你选择的酶或许没选对。
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2楼2012-10-09 11:04:15
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒PCR的正确性是很高的啦！
在此看来应该是你的酶切问题，体系或者条件应该调整先！
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生物化学与分子生物学
4楼2012-10-09 11:14:11
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:51:17
质粒PCR……虽然楼上各位都说可靠性很高，但是我觉得只要用PCR做验证，可靠性都不是很可靠，我个人只认准酶切
质粒PCR要提高准确度……可以用一条质粒通用引物，一条你个人设计的引物去配对PCR，这样可靠性相对要高很多了.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-09 15:18:51
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒PCR可信度是很高的，问题应该是出在你的酶切上，可能是质粒提的不好，或者是酶切位点受甲基化等影响，或者优化酶切条件
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7楼2012-10-09 16:08:51
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wind20020108

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用通用引物，菌液PCR即可
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不知道能说啥
8楼2012-10-09 19:32:22
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
质粒PCR，不太靠谱。。。
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jiayoubashaonian
9楼2012-10-09 21:44:31
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mine8008

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2012-10-09 11:14:11
质粒PCR的正确性是很高的啦！
在此看来应该是你的酶切问题，体系或者条件应该调整先！

那应该用什么样的体系呀，我用的是目的片段5，载体3，T4酶1，BUFF1
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10楼2012-10-10 08:32:39
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