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mine8008

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒PCR用来验证阳性的可靠性

质粒PCR用来验证阳性的可靠性为什么低?为什么酶切切不开,可是质粒PCR却能看见目的带?
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:51:03
PCR检测只是为下一步酶切奠定基础,一般酶切选则的是PCR验证正常的质粒,PCR有结果但是切不开是很正常的,如果你的内切酶选择没有问题的话,那就是你PCR是假阳性的!
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-10-09 11:10:02
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hofo336699

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒PCR可靠性是很高的。
当然,假阳性除外
懒虫啊!
5楼2012-10-09 11:35:52
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒PCR可靠性是很高的。
可以切开。你选择的酶或许没选对。
2楼2012-10-09 11:04:15
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒PCR的正确性是很高的啦!
在此看来应该是你的酶切问题,体系或者条件应该调整先!
生物化学与分子生物学
4楼2012-10-09 11:14:11
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:51:17
质粒PCR……虽然楼上各位都说可靠性很高,但是我觉得只要用PCR做验证,可靠性都不是很可靠,我个人只认准酶切
质粒PCR要提高准确度……可以用一条质粒通用引物,一条你个人设计的引物去配对PCR,这样可靠性相对要高很多了.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-09 15:18:51
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒PCR可信度是很高的,问题应该是出在你的酶切上,可能是质粒提的不好,或者是酶切位点受甲基化等影响,或者优化酶切条件
7楼2012-10-09 16:08:51
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wind20020108

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用通用引物,菌液PCR即可
不知道能说啥
8楼2012-10-09 19:32:22
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

质粒PCR,不太靠谱。。。
jiayoubashaonian
9楼2012-10-09 21:44:31
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mine8008

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2012-10-09 11:14:11
质粒PCR的正确性是很高的啦!
在此看来应该是你的酶切问题,体系或者条件应该调整先!

那应该用什么样的体系呀,我用的是目的片段5,载体3,T4酶1,BUFF1
10楼2012-10-10 08:32:39
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