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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒的PCR
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ValYu

银虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒的PCR

Taq酶是有5'->3'外切活性的，这样的话Taq酶沿着质粒复制一圈回到起点后就会一边外切一边复制，造成缺口的移动，这样的话后面的复制就会混乱，得不到目的片段。我是新手，不太明白，还望大侠指教！
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生命灿烂，精神永恒
1楼 2012-05-01 15:06:16
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-01 20:12:42
呵呵，所谓的质粒pcr是指扩增质粒上的一段线性dna，而不是扩增质粒，扩增质粒是用菌体繁殖来实现，就是菌的扩大培养吗，至于质粒扩增的机制还是挺复杂的，有滚环复制等几种，你可以看一下相关书籍，希望有帮助
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我努力我奋斗我成功
2楼2012-05-01 16:50:23
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ValYu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-05-01 16:50:23:
呵呵，所谓的质粒pcr是指扩增质粒上的一段线性dna，而不是扩增质粒，扩增质粒是用菌体繁殖来实现，就是菌的扩大培养吗，至于质粒扩增的机制还是挺复杂的，有滚环复制等几种，你可以看一下相关书籍，希望有帮助

我知道质粒PCR的目的只是拿到其中一段线性序列，这段序列不就是两个引物之间的那一段吗？但是如果缺口移动的话，就得不到你要的那段序列了，你可以画个图看看……
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生命灿烂，精神永恒
3楼2012-05-01 17:13:05
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by ValYu at 2012-05-01 17:13:05:
我知道质粒PCR的目的只是拿到其中一段线性序列，这段序列不就是两个引物之间的那一段吗？但是如果缺口移动的话，就得不到你要的那段序列了，你可以画个图看看……

既然只是一段线性序列，又哪来的“缺口移动”呢？
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4楼2012-05-02 19:22:36
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ValYu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by vir2008 at 2012-05-02 19:22:36:
既然只是一段线性序列，又哪来的“缺口移动”呢？

第一次复制还是环形的啊，原来的质粒是完整的，新合成的互补链会有一个缺口。就像贪食蛇，一边吃自己的尾巴一边前进……
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生命灿烂，精神永恒
5楼2012-05-02 20:04:01
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 恩，很清楚了哦 2012-05-03 13:34:11
ValYu: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 原来是控制时间啊。还画图，太认真了！ 2012-05-03 21:38:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by ValYu at 2012-05-02 20:04:01:
第一次复制还是环形的啊，原来的质粒是完整的，新合成的互补链会有一个缺口。就像贪食蛇，一边吃自己的尾巴一边前进……

哦，我明白你的意思了。
不过一般来说，质粒比较大，PCR的延伸时间不足以给聚合酶环形复制的时间，所以第一次循环的产物应该是中间待扩增部分互补，两端有冗余单链的杂交分子；从第二次循环开始，PCR产物就归于正常了。
我画了一个图，不知能否解释清楚：
（黑色部分为待扩增片段，红色部分为两侧冗余片段）。
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6楼2012-05-02 22:36:05
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