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崩溃了 难题 跪求解答：质粒提不出，酶切切不开
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PCR的目的基因1056bp连接到PMD18-T载体上，之后转入TOP10感受态细胞，酶切鉴定并测序合适后，保甘油菌种。 接下来奇怪的事情发生了：1.大概有两个星期的时间，甘油菌种转接后，试剂盒不能提出质粒：加入2液后菌液不变澄清。 2.因为之前可以提出的时候还有剩余的质粒，所以将它转入TOP10感受态细胞，之后可以提出并能酶切下我的目的基因。可是过了两个月，保的菌种质粒越提越淡，现在已经提不出来了。 3.由于提不出质粒，所以在2中转的平板中，有挑选了一些克隆，PCR鉴定OK，提出质粒后，酶切片段特别淡，无法胶回收。 我做了三个不同基因连在T载体，然后都出现了相似的问题，到底是怎么回事呢？连在PMD18-T上的基因不是很稳定吗，该载体也应该很稳定啊，为什么酶切不出基因？之前一直能提出质粒的菌种，为什么都无法提出质粒，有两个菌种能提出质粒，但是酶切后还是特别淡？ 一直用的试剂盒提质粒，实验室其它人也在用没有问题，到底问题出在哪了，求神人解答！ |
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