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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 测序质粒提不出来

构建了一个质粒,转到大肠杆菌之后,挑单菌落活化再重新提质粒,酶切验证以后,发现大小是对的,就取了一部分菌液送去测序,结果测序公司说质粒提不出来,不清楚是怎么回事,有遇到类似情况的吗?
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-31 13:08:16
不用去找原因,测序公司很多都不靠谱的,这是我们遇到问题的首选。比如把你样品加错抗性摇菌了,也会告诉你提不出来。。。。直接让他从做一次就可以了,或者自己送质粒。质粒浓度,一般的公司要求50ng/ul就足够了,我测过20ng/ul。
7楼2013-10-31 10:34:07
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1 2013-10-28 15:03:35
你自己提一遍,如果没问题就把菌液和提取的质粒同时给他,让他先提,还提不出来就用质粒测序。

还有一种可能就是测序公司不靠谱,换公司
岂能尽如人意,但求无愧我心
2楼2013-10-28 14:53:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-28 14:53:31
你自己提一遍,如果没问题就把菌液和提取的质粒同时给他,让他先提,还提不出来就用质粒测序。

还有一种可能就是测序公司不靠谱,换公司

我自己提的浓度达不到测序公司的要求,他要求200ng/ul,我只能提到几十纳克。
3楼2013-10-28 16:02:40
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bleach060452

新虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 16:32:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-10-28 16:02:40
我自己提的浓度达不到测序公司的要求,他要求200ng/ul,我只能提到几十纳克。...

那就有可能是你的质粒有问题了,在确定试剂和操作方法没问题的情况下再提一下,有可能是拷贝数低,有可能是其他问题~~

最直接的解决办法:想达到浓度,就多摇几管菌小提,最后洗脱是用一管的洗脱液量去洗脱多管,看一下浓度如何吧

或者做一下分区划线,筛选+活化一下
岂能尽如人意,但求无愧我心
4楼2013-10-28 17:06:05
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