应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教不知道质粒信息的情况下，怎样设计引物来进行测序
81/1返回列表
查看: 2603  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

caiyouhua1983

金虫 (正式写手)

[交流] 请教不知道质粒信息的情况下，怎样设计引物来进行测序 已有4人参与

请教各位虫友，我有个菌里面有个质粒，试了各种常用的抗性（amp,kan,cm,ter等），都不能长，在对这个质粒信息一概不知的情况下，请问有没有什么较理想的办法，知道这个质粒的信息？怎样去设计测序引物，能不能从启动子和复制子这块下手？质粒的复制子序列都一样吗？多谢~！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

质粒构建 测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
正确对待别人，清醒对待自己！
1楼 2013-03-16 11:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhome

木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把你发现的质粒纯化出来，理论上，可以根据启动子和复制子测序，但启动子和复制子序列不尽相同，可以试一下。那么你是怎么发现的这个质粒的呢，从这方面或许可以找到线索。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

caiyouhua1983
虫洞
2楼2013-03-17 03:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒能提取出来吗？提质粒，酶切，连到测序载体，测序。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-17 08:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caiyouhua1983

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-03-17 08:56:44
质粒能提取出来吗？提质粒，酶切，连到测序载体，测序。

感谢回复，质粒已经提取出来了，拷贝数很低，那是用单酶切，还是双酶切呢？能讲得具体点吗？
赞一下 回复此楼
正确对待别人，清醒对待自己！
4楼2013-03-17 11:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caiyouhua1983

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianhome at 2013-03-17 03:41:25
把你发现的质粒纯化出来，理论上，可以根据启动子和复制子测序，但启动子和复制子序列不尽相同，可以试一下。那么你是怎么发现的这个质粒的呢，从这方面或许可以找到线索。

表达载体的复制子序列，是有限的几种吗？是那几个序列？多谢！
赞一下 回复此楼
正确对待别人，清醒对待自己！
5楼2013-03-17 11:07:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提出质粒后。找几个酶切切看，出来片段的话就连到同样酶切的克隆载体上。用载体引物进行测序。
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-17 14:07:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by caiyouhua1983 at 2013-03-17 11:03:13
感谢回复，质粒已经提取出来了，拷贝数很低，那是用单酶切，还是双酶切呢？能讲得具体点吗？...

都可以，片段太大的话双酶切。你先找一两个能切开目标质粒的酶，然后酶切连入测序载体测序。
考虑到你的目标质粒上可能有抑制感受态细菌生长、质粒复制的元件，最好能将质粒切成若干片段分别连接测序。当然，运气好的话一次连接测序就搞掂了。
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-17 17:31:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dynamicren

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计你的是隐蔽质粒吧，对这个的研究我有过关注，通常是提取出来后，选一些常见的限制性内切酶进行酶切，然后再选一两个切得开的酶切回收后连入T载体测序。根据这部分测序所得的已知序列进行geneome walking测序，就行了。
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-25 07:50:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 caiyouhua1983 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 材料与化工考研调剂 +3 孅華 2026-03-22 3/150 2026-03-23 11:20 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +6 生物工程调剂 2026-03-17 10/500 2026-03-22 20:22 by edmund7
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭