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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于质粒的引物设计
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tianpeng001

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于质粒的引物设计 已有5人参与

质粒的全场序列已得知，现在我想设计一对引物把序列的全场扩增出来，用dnaman应该如何操作？
环状的质粒序列写出来是线状的，用软件设计引物只能扩增出其中的一个片段，有哪位高人知道如何设计引物能扩增出质粒的全长吗？谢谢
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1楼 2011-03-17 21:05:22
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~ 2011-03-17 22:06:23
用一对相互有重叠的反向引物扩增即可。

具体引物设计可以查找 定点突变时的引物设计。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-03-17 21:31:18
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tianpeng001

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-17 21:31:18:
用一对相互有重叠的反向引物扩增即可。

具体引物设计可以查找 定点突变时的引物设计。

好的，谢谢 我这就去找
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3楼2011-03-18 09:10:23
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tianpeng001 at 2011-03-17 21:05:22:
质粒的全场序列已得知，现在我想设计一对引物把序列的全场扩增出来，用dnaman应该如何操作？
环状的质粒序列写出来是线状的，用软件设计引物只能扩增出其中的一个片段，有哪位高人知道如何设计引物能扩增出质粒 ...

为了保证扩增，PCR前一般质粒线性化处理（单酶切），所以你可以先选个酶切位点，然后设计的引物就再酶切位点两边。
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4楼2011-03-18 09:39:55
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dangerhood

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-17 21:31:18
用一对相互有重叠的反向引物扩增即可。

具体引物设计可以查找 定点突变时的引物设计。

请问一下，我在做质粒的定点突变，请问PCR的引物用软件可以设计吗？希望大神可以给出具体的方法。。。

感觉像OLIGO之类的软件都只能设计线性DNA的引物啊，因为质粒定点突变的引物是互补序列，感觉没有办法用软件做啊。。。

谢谢啦。。。。
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5楼2015-03-28 12:44:10
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SAM001

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议使用反向PCR技术。
就是在质粒中选取某个位置，在它的左边设计一条反向引物，在它的右边设计一条正向引物。引物的扩增方向要正好相反
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6楼2015-03-28 22:15:47
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