应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于设计ＧＦＰ的引物设计问题。专家请入内
41/1返回列表
查看: 2650  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Jocal

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于设计ＧＦＰ的引物设计问题。专家请入内

我想设计一个GFP引物（用于pET32a质粒载体）。想在引物上游引入Xho I 酶切位点，下游引入Ava I 酶切位点。也可上下游都用同一个酶切位点。但就想在这两个酶中选（因为实验室条件有限，只有这两种酶）。
        用primer premier5 搞了一两星期了，。至今没有设计出合适的引物，。因时间上的迫切，还望各位高手指点，帮忙。
                
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
又是差不多的一年！
1楼 2011-07-26 09:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 专家回答的尽量专业些，才好给EPI。呵呵 2011-07-26 20:49:32
很简单吧，就在首尾引物的5‘端各自添加上这两个酶切位点序列就可以了啊
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-26 20:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不明白要设计什么？你没得选择嘛，就算引物不好也得是首尾那二十几个碱基加上酶切位点呀，5'端再加三个保护碱基。
赞一下 回复此楼
生命不息，探索不止。
3楼2011-07-26 23:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12zhangwei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励经验交流 2011-07-30 13:25:32
我用的引物是      保护碱基     酶切位点      与模板配对部分
     下游        cgc             gagctc            ttacttgta cag ctc gtc
下游引物不好意思找不到了
因为扩GFP的ORF,只能在起始密码子和终止密码子那设计，酶切位点固定了，只需在与模板配对部分调整，什么样的酶且位点用什么保护碱基网上查得到，所以尽可大胆的设计合成出来，到时候跑个梯度就行了，
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-27 10:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Jocal 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭