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Jocal

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于设计ＧＦＰ的引物设计问题。专家请入内

我想设计一个GFP引物（用于pET32a质粒载体）。想在引物上游引入Xho I 酶切位点，下游引入Ava I 酶切位点。也可上下游都用同一个酶切位点。但就想在这两个酶中选（因为实验室条件有限，只有这两种酶）。
        用primer premier5 搞了一两星期了，。至今没有设计出合适的引物，。因时间上的迫切，还望各位高手指点，帮忙。
                
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又是差不多的一年！
1楼 2011-07-26 09:20:33
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 专家回答的尽量专业些，才好给EPI。呵呵 2011-07-26 20:49:32
很简单吧，就在首尾引物的5‘端各自添加上这两个酶切位点序列就可以了啊
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-26 20:25:27
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不明白要设计什么？你没得选择嘛，就算引物不好也得是首尾那二十几个碱基加上酶切位点呀，5'端再加三个保护碱基。
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生命不息，探索不止。
3楼2011-07-26 23:11:06
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12zhangwei

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励经验交流 2011-07-30 13:25:32
我用的引物是      保护碱基     酶切位点      与模板配对部分
     下游        cgc             gagctc            ttacttgta cag ctc gtc
下游引物不好意思找不到了
因为扩GFP的ORF,只能在起始密码子和终止密码子那设计，酶切位点固定了，只需在与模板配对部分调整，什么样的酶且位点用什么保护碱基网上查得到，所以尽可大胆的设计合成出来，到时候跑个梯度就行了，
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4楼2011-07-27 10:11:32
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