| 查看: 2615 | 回复: 13 | ||
高照李木虫 (正式写手)
|
[求助]
求解PCR问题《忘记加水的前后》
|
|
|
我要扩增昆虫线粒体DNA的一个片段，前天做退火温度的梯度PCR实验时时侯忙中出错忘记加水了（需定容至50微升），扩出的结果用琼脂糖凝胶电泳检测时发现有3 个温度的样本有片段（40-52度的梯度，41.6度、48度和50度的有，41.6度的最亮），且和需要的大小相近，其它温度的样本则没有扩出。我又重新做了一遍退火温度的梯度PCR（所有试剂都加好了无遗漏），但什么也没出。 请问这是什么原因？请问哪位大侠知道。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有67人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
PCR结果这样，求解
已经有13人回复- Q -PCR的NTC老是起来，而且和样本的CT值一样，求解。
已经有5人回复
- 请问一个PCR连接的问题
已经有9人回复
- 关于in-fusion PCR问题
已经有27人回复
- 关于PCR的问题
已经有4人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- 梯度PCR退火温度
已经有11人回复
- PCR就扩出过一次带，以后再也扩不出来，为什么，求指导
已经有6人回复
- 求解读此PCR 为何如此不堪入目
已经有12人回复
- PCR电泳图求解
已经有13人回复
- PCR扩增 非特异性条带求解
已经有5人回复
- 求解读此PCR 为何如此不堪入目
已经有31人回复
- 昆虫基因PCR后电泳条带淡，急求帮助？？？？
已经有4人回复
- 梯度PCR的问题
已经有7人回复
- 怎么确定变性和退火温度
已经有5人回复
- PCR电泳图，条带很多还拖尾。。求解
已经有4人回复
- 求解：实时荧光定量PCR奇峰
已经有18人回复
- 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
已经有10人回复
- PCR重复不出来
已经有20人回复
reallpf
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-11-22 20:15:36
高照李4楼2012-11-22 23:18:32
weigh1111
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 118 (高中生)
- 金币: 5594.4
- 红花: 1
- 帖子: 580
- 在线: 223.9小时
- 虫号: 478345
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
6楼2012-11-23 08:33:06
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
11楼2012-11-23 12:06:14
高照李
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4515.6
- 散金: 42
- 帖子: 670
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1065118
- 注册: 2010-07-27
- 性别: GG
- 专业: 动物系统及分类学
|
多谢学长回复，我这两天有重做了，温度梯度还是没做出来，模板浓度梯度、酶浓度梯度也做了还是没出。引物空白对照也做了，引物没问题。我做的是几种昆虫的DNA线粒体DNA COI片段，目的基因大小约600-700bp,用pcr扩增COI片段，50μl的扩增反应体系是： Premix Ex Taq 25μl 引物1（LCO1490)（20μM）1μl 引物2 (HCO2198)（20μM）1μl 模板1μl（<50ng）1μl 灭菌蒸馏水 22μl PCR反应程序：94℃预变性3min，94℃变性60s，50℃退火60s，72℃延伸60s，共35个循环，循环结束后，72℃延伸10min。 麻烦您能否帮我看一下，有可能是哪出的问题？ |
3楼2012-11-22 23:09:23
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
5楼2012-11-22 23:36:56
高照李
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4515.6
- 散金: 42
- 帖子: 670
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1065118
- 注册: 2010-07-27
- 性别: GG
- 专业: 动物系统及分类学
7楼2012-11-23 11:46:00
qiuqu_200212
至尊木虫 (知名作家)
无助又无奈
- 应助: 366 (硕士)
- 金币: 32044.4
- 散金: 7
- 红花: 16
- 帖子: 9341
- 在线: 384.6小时
- 虫号: 286764
- 注册: 2006-10-15
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2012-11-23 11:50:20
高照李
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4515.6
- 散金: 42
- 帖子: 670
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1065118
- 注册: 2010-07-27
- 性别: GG
- 专业: 动物系统及分类学
9楼2012-11-23 11:50:29
高照李
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4515.6
- 散金: 42
- 帖子: 670
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1065118
- 注册: 2010-07-27
- 性别: GG
- 专业: 动物系统及分类学
10楼2012-11-23 12:01:04