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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增 非特异性条带求解
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wocause

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增 非特异性条带求解

求助！按找文献（附件）提供的COI引物进行扩增出来全是非特性带应该肿么处理呢？目标条带应该在1420bp.文献给的引物是简并引物，且未配对，上游3个，下游三个，自己排列组合为9个，同时加了个混合的。进行扩增。为嘛就是不出特异性条带呢？？？急用。在线等。大谢！
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1楼 2013-05-04 19:23:27
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:39:02
没看懂你说的什么意思。如果是P不出目的条带，提高退火温度，1400多延伸时间设置2分钟试试
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2楼2013-05-04 20:41:50
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wocause

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-04 20:41:50
没看懂你说的什么意思。如果是P不出目的条带，提高退火温度，1400多延伸时间设置2分钟试试

延伸2分钟后也没P出来。主要就是那个引物是直接给出了3个上游和三个下游又没有配对，也没说用法、然后我就不知道咋办了噻。就只能排列组合成9对同时P。结果就是这样的。提高退火温度，提高多少合适呢？？？
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3楼2013-05-04 20:46:20
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wocause at 2013-05-04 20:46:20
延伸2分钟后也没P出来。主要就是那个引物是直接给出了3个上游和三个下游又没有配对，也没说用法、然后我就不知道咋办了噻。就只能排列组合成9对同时P。结果就是这样的。提高退火温度，提高多少合适呢？？？...

你的意思是你又3对引物？那你就做个梯度PCR这样比较稳妥，温度从68-53，或者直接TouchdownPCR试试
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4楼2013-05-05 11:30:41
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高退火温度。降低mg2+的量，可以降低非特异条带。你可以发封信过去问问嘛。
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5楼2013-05-05 11:37:36
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wocause

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dmtxbb at 2013-05-05 11:37:36
提高退火温度。降低mg2+的量，可以降低非特异条带。你可以发封信过去问问嘛。

外文文献，发了封邮件过去，没回我
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6楼2013-05-05 13:41:28
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