| 查看: 3358 | 回复: 20 | ||
[求助]
求助DGGE染色问题
|
各位：小弟最近跑DGGE，不知道是哪里出问题，PCR产物的琼脂糖电泳条带都非常亮，但是跑DGGE的时候染色完后都出现一片明亮的条带，已经不是一次了，而且我同学也有这种情况出现，请各位帮忙分析下。使用的是super greenI染色，1.5微升用1XTAE稀释10000倍表面涂抹染色两次，每次15分钟。DNA模板为去年9月份提取的昆虫肠道总DNA，－20摄氏度保存，有反复冻融现象，如果是DNA问题，但是PCR产物使用琼脂糖检测都是非常好的条带。下面有附图     [ Last edited by 5018 on 2011-4-23 at 17:31 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有218人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DGGE胶染色是破了，还能分析吗
已经有5人回复
- 求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱
已经有6人回复
- 关于DGGE的问题，谢谢
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助DGGE的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】DGGE遇到了难题，向大家求助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】DGGE实验染色问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于DGGE，求助
已经有9人回复
- 【求助/交流】土壤微生物，PCR-DGGE细节如何操作？
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教DGGE电泳图
已经有7人回复
- 【求助/交流】细菌DNA提取
已经有11人回复
- 【求助/交流】DGGE实验条带不清晰
已经有10人回复
- 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR-DGGE的图
已经有16人回复
2楼2011-04-24 19:02:32
3楼2011-04-25 23:19:34
4楼2011-04-26 09:44:44
5楼2011-04-27 22:54:15
caisanrenju
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2054.5
- 散金: 239
- 红花: 2
- 帖子: 411
- 在线: 129.1小时
- 虫号: 1263848
- 注册: 2011-04-13
- 专业: 食品科学基础
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
5018(金币+5): 2011-04-30 21:57:12
lstt09nk(金币+5): 不错~~ 2011-05-05 18:25:09
5018(金币+5): 2011-04-30 21:57:12
lstt09nk(金币+5): 不错~~ 2011-05-05 18:25:09
|
1. 想详细问一下梯度。如果第一张破了的胶浓度是30-70的话，建议楼主用35-60。50的浓度，不太确定能不能完全分开。 2. 看LZ说电泳的电压时间有120V，16h，不知道哪张胶是这个条件。如果是下边两个，估计问题就在这里了。告诉你一个秘密，电压乘以电泳时间（h）的乘积等于1000，是最好的。 3. PCR产物非特异带太多，一定要改进PCR条件，提高退火温度，最好降落PCR，然后再进行纯化 4. 还想问一下胶的浓度是多少（聚丙烯酰胺的浓度）？还有就是可否告知测的是哪一区的基因，因为看你的PCR产物<200bp（如果Mark是100bp的话），有点奇怪 |
6楼2011-04-28 13:57:46
wallace974
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1656.4
- 散金: 162
- 帖子: 293
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 459784
- 注册: 2007-11-15
- 性别: GG
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
7楼2011-04-28 17:17:05
8楼2011-04-30 22:01:03
9楼2011-04-30 22:01:29
匿名
用户注销 (著名写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1670.9
- 散金: 811
- 红花: 11
- 帖子: 1245
- 在线: 297.1小时
- 虫号: 0
- 注册: 2010-11-27
- 专业: 环境微生物学
10楼2011-05-05 16:54:03
