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clearth木虫之王 (正式写手)
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【求助/交流】请教DGGE电泳图 已有7人参与
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我跑的这是土壤中放线菌的DGGE电泳，条件如下：6%的丙烯酰胺凝胶；45%-60%的变性梯度；放线菌PCR片段：433bp；电压：70V；电泳时间：14h；电泳液：1×TAE。 整体和局部电泳图如下所示，请大家讨论以下，如何改进，才能跑出好的电泳图来，先谢谢大家了。    |
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2楼2010-08-10 11:33:28
xiadongliang
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3楼2010-08-10 11:42:16
4楼2010-08-10 16:08:25
5楼2010-08-10 16:26:37
关于DGGE
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):鼓励新人交流 2010-08-11 11:41:38
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):鼓励新人交流 2010-08-11 11:41:38
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DGGE我做过 结果还不错 以下是我的操作 你看看 希望对你有帮助 （1）变性胶的制备：变性剂浓度范围为30%~60%（100%的变性剂为7mol/L的尿素和40%的去离子甲酰胺的混合物），胶浓度为8%，变性剂的浓度从上向下递增。 (2) PCR样品的加样：在每个加样孔加入含有10%的加样缓冲液的PCR样品20μl。 (3) 电泳及染色：150V，60℃电泳5h。电泳完毕后，将凝胶在SYBR Green I中染色约30min。 个人感觉 跑胶的时间没必要那么长，胶浓度8%就行 再低的不坚韧，除此之外就是你的PCR产物是否理想 |
6楼2010-08-11 11:07:37
clearth
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