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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教DGGE电泳图
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉

[交流] 【求助/交流】请教DGGE电泳图 已有7人参与

我跑的这是土壤中放线菌的DGGE电泳，条件如下：6%的丙烯酰胺凝胶；45%-60%的变性梯度；放线菌PCR片段：433bp；电压：70V；电泳时间：14h；电泳液：1×TAE。
整体和局部电泳图如下所示，请大家讨论以下，如何改进，才能跑出好的电泳图来，先谢谢大家了。
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1楼 2010-08-10 09:44:13
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):鼓励 2010-08-11 11:41:06
胶配的不好  条带跑弯了 没在一条直线上 可以扩大下梯度范围 6%的胶不碎吗？ 我做过6。5%  基本染色完就碎了
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2楼2010-08-10 11:33:28
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-08-10 12:53:11
原因是多方面的
1 PCR产物是否能够满足DGGE实验条件。条带扩增单一，浓度高。
2 DGGE凝胶配置合格：变性梯度合理，胶浓度合适，各试剂最好选择进口产品。
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3楼2010-08-10 11:42:16
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fang8596

金虫 (小有名气)
边缘效应。跟电泳槽也有关系吧～
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4楼2010-08-10 16:08:25
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希望之光

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):新人鼓励 常来 2010-08-11 11:41:25
好像是电泳仪的问题 还有TE加多了
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5楼2010-08-10 16:26:37
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jndxmmc

新虫 (小有名气)

关于DGGE

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):鼓励新人交流 2010-08-11 11:41:38
DGGE我做过 结果还不错 以下是我的操作 你看看 希望对你有帮助
（1）变性胶的制备：变性剂浓度范围为30%~60%（100%的变性剂为7mol/L的尿素和40%的去离子甲酰胺的混合物），胶浓度为8%，变性剂的浓度从上向下递增。
(2) PCR样品的加样：在每个加样孔加入含有10%的加样缓冲液的PCR样品20μl。
(3) 电泳及染色：150V，60℃电泳5h。电泳完毕后，将凝胶在SYBR Green I中染色约30min。

个人感觉 跑胶的时间没必要那么长，胶浓度8%就行 再低的不坚韧，除此之外就是你的PCR产物是否理想
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6楼2010-08-11 11:07:37
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
引用回帖:
Originally posted by jndxmmc at 2010-08-11 11:07:37:
DGGE我做过 结果还不错 以下是我的操作 你看看 希望对你有帮助
（1）变性胶的制备：变性剂浓度范围为30%~60%（100%的变性剂为7mol/L的尿素和40%的去离子甲酰胺的混合物），胶浓度为8%，变性剂的浓度从上向下递增 ...

非常感谢
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7楼2010-08-11 16:44:16
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virgo沙加

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跑弯了应该是电压过大~
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8楼2012-07-23 23:26:31
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