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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉

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[交流] 【求助/交流】请教DGGE电泳图已有7人参与

我跑的这是土壤中放线菌的DGGE电泳，条件如下：6%的丙烯酰胺凝胶；45%-60%的变性梯度；放线菌PCR片段：433bp；电压：70V；电泳时间：14h；电泳液：1×TAE。
整体和局部电泳图如下所示，请大家讨论以下，如何改进，才能跑出好的电泳图来，先谢谢大家了。

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【求助/交流】DGGE遇到了难题，向大家求助！已经有10人回复

1楼2010-08-10 09:44:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jndxmmc

新虫 (小有名气)

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关于DGGE

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):鼓励新人交流 2010-08-11 11:41:38

DGGE我做过结果还不错以下是我的操作你看看希望对你有帮助
（1）变性胶的制备：变性剂浓度范围为30%~60%（100%的变性剂为7mol/L的尿素和40%的去离子甲酰胺的混合物），胶浓度为8%，变性剂的浓度从上向下递增。
(2) PCR样品的加样：在每个加样孔加入含有10%的加样缓冲液的PCR样品20μl。
(3) 电泳及染色：150V，60℃电泳5h。电泳完毕后，将凝胶在SYBR Green I中染色约30min。

个人感觉跑胶的时间没必要那么长，胶浓度8%就行再低的不坚韧，除此之外就是你的PCR产物是否理想