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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 求助DGGE染色问题
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5018

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助DGGE染色问题

各位：小弟最近跑DGGE，不知道是哪里出问题，PCR产物的琼脂糖电泳条带都非常亮，但是跑DGGE的时候染色完后都出现一片明亮的条带，已经不是一次了，而且我同学也有这种情况出现，请各位帮忙分析下。使用的是super greenI染色，1.5微升用1XTAE稀释10000倍表面涂抹染色两次，每次15分钟。DNA模板为去年9月份提取的昆虫肠道总DNA，－20摄氏度保存，有反复冻融现象，如果是DNA问题，但是PCR产物使用琼脂糖检测都是非常好的条带。下面有附图










[ Last edited by 5018 on 2011-4-23 at 17:31 ]
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一杯香茗，一卷书，偷得半日闲散；一抹斜阳，一壶酒，愿求半世逍遥。
1楼 2011-04-22 13:54:54
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5018

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wwling at 2011-04-24 19:02:32:
PCR产物纯化了吗？从PCR产物普通电泳来看，好像有非特异带哦
  或者上样量太多了？

PCR不需要纯化的吧 而且非特异性扩增也是DNA 也得有条带啊 我现在的情况是PCR狠亮 但是DGGE没条带啊。
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一杯香茗，一卷书，偷得半日闲散；一抹斜阳，一壶酒，愿求半世逍遥。
3楼2011-04-25 23:19:34
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wwling

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:17:22
PCR产物纯化了吗？从PCR产物普通电泳来看，好像有非特异带哦
  或者上样量太多了？
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2楼2011-04-24 19:02:32
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:17:31
是不是和你的电泳条件设置有关啊？你的梯度是多少啊？电压和时间呢？
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4楼2011-04-26 09:44:44
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5018

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2011-04-26 09:44:44:
是不是和你的电泳条件设置有关啊？你的梯度是多少啊？电压和时间呢？

应该没关系  梯度从30%－70%到最后的40%－50%，电压有200V跑5个小时，有120V跑16小时
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一杯香茗，一卷书，偷得半日闲散；一抹斜阳，一壶酒，愿求半世逍遥。
5楼2011-04-27 22:54:15
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