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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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afraidroom

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DGGE实验条带不清晰已有8人参与

近来做DGGE实验,120v,55℃,12h。8%的变性胶,梯度范围30-60%,最近情况是,条带也分开了,也有,就是不很清晰,而且银染背景色有些深。想向高手请教下是什么情况?谢谢指教
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yaoyl0679

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上图,不然不好说
2楼2010-06-21 18:14:48
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afraidroom

木虫 (小有名气)



这两张照片是一次的结果,后者用灯箱照射下的图片
3楼2010-06-22 15:09:32
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won7

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-23 06:03:08
感觉PCR有点问题,制胶也不好。
4楼2010-06-22 16:44:40
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smallcat227

木虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-23 06:03:15
感觉条带很少啊,能把PCR的图上传下吗?另外楼主要回收条带测序么,不回收的话可以试试EB染,效果相对好一点
5楼2010-06-22 21:54:02
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afraidroom

木虫 (小有名气)

条带是要回收测序的

这是PCR的图片
6楼2010-06-23 13:42:27
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afraidroom

木虫 (小有名气)

EB染色的也试过,是这样的。DGGE胶在EB中染色后看不到条带,不知道是什么情况,染色2-3h都没条带,这个染色液染琼脂糖胶就很清晰。
7楼2010-06-23 13:44:32
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tangjiah

新虫 (小有名气)

关键是胶的问题


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得关键是做胶的问题,你的胶好像没有做好。背景的问题是你的用药不对,主要是最后显色的药剂问题。个人看法,仅供参考...
8楼2010-09-22 23:32:06
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by afraidroom at 2010-06-21 16:16:51:
近来做DGGE实验,120v,55℃,12h。8%的变性胶,梯度范围30-60%,最近情况是,条带也分开了,也有,就是不很清晰,而且银染背景色有些深。想向高手请教下是什么情况?谢谢指教

你的胶的浓度梯度可能不是很好!没有均匀~

另外你的电压和稳定可以再优化下
9楼2010-09-23 13:39:03
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zking5129

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上样量是多少?有可能你其他的条带的含量就很少,可以浓缩样品之后再试一下。
10楼2010-09-25 12:22:32
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