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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DGGE实验条带不清晰
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afraidroom

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DGGE实验条带不清晰 已有8人参与

近来做DGGE实验，120v，55℃，12h。8%的变性胶，梯度范围30-60%，最近情况是，条带也分开了，也有，就是不很清晰，而且银染背景色有些深。想向高手请教下是什么情况？谢谢指教
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1楼 2010-06-21 16:16:51
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yaoyl0679

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上图，不然不好说
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2楼2010-06-21 18:14:48
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afraidroom

木虫 (小有名气)


这两张照片是一次的结果，后者用灯箱照射下的图片
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3楼2010-06-22 15:09:32
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won7

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-23 06:03:08
感觉PCR有点问题，制胶也不好。
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4楼2010-06-22 16:44:40
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-23 06:03:15
感觉条带很少啊，能把PCR的图上传下吗？另外楼主要回收条带测序么，不回收的话可以试试EB染，效果相对好一点
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5楼2010-06-22 21:54:02
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afraidroom

木虫 (小有名气)
条带是要回收测序的

这是PCR的图片
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6楼2010-06-23 13:42:27
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afraidroom

木虫 (小有名气)
EB染色的也试过，是这样的。DGGE胶在EB中染色后看不到条带，不知道是什么情况，染色2-3h都没条带，这个染色液染琼脂糖胶就很清晰。
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7楼2010-06-23 13:44:32
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tangjiah

新虫 (小有名气)

关键是胶的问题

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得关键是做胶的问题，你的胶好像没有做好。背景的问题是你的用药不对，主要是最后显色的药剂问题。个人看法，仅供参考...
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8楼2010-09-22 23:32:06
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by afraidroom at 2010-06-21 16:16:51:
近来做DGGE实验，120v，55℃，12h。8%的变性胶，梯度范围30-60%，最近情况是，条带也分开了，也有，就是不很清晰，而且银染背景色有些深。想向高手请教下是什么情况？谢谢指教

你的胶的浓度梯度可能不是很好！没有均匀~

另外你的电压和稳定可以再优化下
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9楼2010-09-23 13:39:03
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zking5129

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上样量是多少？有可能你其他的条带的含量就很少，可以浓缩样品之后再试一下。
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10楼2010-09-25 12:22:32
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