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Restarter

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么maker跑不开? 已有10人参与

maker为什么跑不开啊,我点的是50bp的maker,可以分开9条带,分别是500、400、350、300、250、200、150、100、50,而我要的是170的片段,我用的是那种小的电泳槽,估计10*20平方厘米大,电压用的110V,下面是我跑胶结果,请能人指导指导!

为什么maker跑不开?
2014.10.7.2.jpg
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圆yy

新虫 (初入文坛)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-08 12:29:06
Restarter: 金币+2 2014-10-08 16:47:08
1、电压调到100v左右
2、胶浓度1.5%左右
3、电泳缓冲液新配
看看结果还会不会那个样子
3楼2014-10-08 10:53:17
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cuihao102

木虫 (小有名气)

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Restarter: 金币+2 2014-10-08 16:46:56
貌似你的胶本身就有问题,除了marker,你的产物也没分开啊!配胶的缓冲液浓度和电泳缓冲液浓度一致不,胶浓度大小也需要考虑,不同大小的片段需用不同浓度的胶

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-10-08 11:50:53
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生物是个坑

新虫 (初入文坛)

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Restarter: 金币+10, 有帮助 2014-10-08 16:44:04
缓冲液换新的,胶浓度调至2.5%,一般来说凝胶浓度对应着线性双链DNA的分离范围。50bp-2000bp对应的胶浓度是2.0%。楼主50bp的ladder建议胶浓度在2.5%。再有就是电场强度,跑电泳是不能只看是多少电压,而是应该计算电场强度。通常小片段DNA(小于1000bp)使用相对较高的电场强度(比如7.5V/cm);电场强度计算方法是电压与正负电极之间距离的比例,也就是你通电后槽里那两条冒泡的线之间的距离和电压的比值。
7楼2014-10-08 15:44:31
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cya_yanan

银虫 (小有名气)

图中的maker,条带都推挤在一起了,显然没跑开,所以看上去区分不明显.110v 时间多长啊?可能时间短了 提高电压或时间,我一般120v 25min 左右
13楼2014-10-08 17:18:59
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普通回帖

yunshenglmm

金虫 (小有名气)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-08 12:29:00
Restarter: 金币+1 2014-10-08 16:47:17
胶浓度提高到1.2%-2%,应该能够把小片段分开,但是胶浓度高,凝胶会很快,配胶的时候需要迅速
2楼2014-10-08 10:16:55
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鼎鼎云菜

新虫 (初入文坛)

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-08 12:29:15
Restarter: 金币+1 2014-10-08 16:46:35
考虑下浓度的问题吧

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-10-08 12:17:50
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gejiaoyu

铁虫 (初入文坛)

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Restarter: 金币+1 2014-10-08 16:46:21
考虑缓冲液与制胶的缓冲液浓度是否一致
老农民
6楼2014-10-08 14:54:58
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Restarter

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-10-08 10:16:55
胶浓度提高到1.2%-2%,应该能够把小片段分开,但是胶浓度高,凝胶会很快,配胶的时候需要迅速

我的胶浓度是2%的,忘了说了。。
8楼2014-10-08 16:40:54
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Restarter

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 圆yy at 2014-10-08 10:53:17
1、电压调到100v左右
2、胶浓度1.5%左右
3、电泳缓冲液新配
看看结果还会不会那个样子

你说的第二三点我之前都是这样做的,就是电压高低与maker能否跑开有没有很大关系啊?
9楼2014-10-08 16:42:50
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Restarter

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 生物是个坑 at 2014-10-08 15:44:31
缓冲液换新的,胶浓度调至2.5%,一般来说凝胶浓度对应着线性双链DNA的分离范围。50bp-2000bp对应的胶浓度是2.0%。楼主50bp的ladder建议胶浓度在2.5%。再有就是电场强度,跑电泳是不能只看是多少电压,而是应该计算电 ...

谢谢,我马上试一下!
10楼2014-10-08 16:44:24
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