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anni8953

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS跑蛋白新手求助

我跑的条带不是很清晰 背景颜色较深
条带集中在胶的上半部分
用的是12%的分离胶 5%浓缩胶
70V转120V
1.5mm 15teech的梳子
上样量 30μg 15ml
求解
SDS跑蛋白新手求助
2013-9-4-1.png
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1楼 2013-09-04 16:43:18
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anni8953

新虫 (初入文坛)
浓缩胶需要染色脱色吗？
我染色时摇会把浓缩胶摇下来
而且感觉浓缩胶上有条带

还有marker有拖尾情况怎么解决？
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2楼2013-09-04 16:53:33
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tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-09-06 07:50:40
anni8953: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢啦 分离胶浓度下降之后就成功了 2013-10-14 18:58:33
上样太多，分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个，蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~
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如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。
3楼2013-09-04 22:09:20
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tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

marker有拖尾估计是跑的时间太长了（因为浓缩胶浓度太高）下面小分子量的蛋白扩散了
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如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。
4楼2013-09-04 22:11:22
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anni8953

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:11:22
marker有拖尾估计是跑的时间太长了（因为浓缩胶浓度太高）下面小分子量的蛋白扩散了

是浓缩胶浓度太高
不是分离胶浓度高？
溴酚蓝都跑到底部了 但是蛋白都在中上部的原因是什么呢？
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5楼2013-09-05 08:24:30
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anni8953

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:09:20
上样太多，分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个，蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~

额 有clean-up试剂盒 但是老师不让用的说
肿么看出来的核算较多捏？
这样跑双向是不是会有影响啊？
新手不懂求教啊！！！
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6楼2013-09-05 08:26:59
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anni8953

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:09:20
上样太多，分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个，蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~

上样量打错了
30μg 15μl
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7楼2013-09-05 08:30:52
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-09-06 07:53:11
我跑胶的时候基本上是习惯吧浓缩胶弄掉，你这个是考染吗？胶有点脏的说。
5%浓缩12%分离一般是没问题的，蛋白为什么在中间的看你蛋白的大小啊，没有小分子量的蛋白的话下面没蛋白也正常啊。你这个是什么蛋白啊？去杂质可以用冷丙酮沉淀过夜，可以去一部分，不过蛋白也会损失一部分。
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8楼2013-09-05 09:53:23
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tujuo

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anni8953 at 2013-09-05 08:24:30
是浓缩胶浓度太高
不是分离胶浓度高？
溴酚蓝都跑到底部了 但是蛋白都在中上部的原因是什么呢？...

打错了，是分离胶太高。一般用不到10%以上的分离胶
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如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。
9楼2013-09-05 14:33:02
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tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖 2013-09-06 07:57:32
其实单独跑电泳的话上样不用太多，上太多了带与带之间的分界就容易模糊，尤其是蛋白条带密集的区域。我一般上样5ul就能跑的很清楚（我的样品蛋白浓度高有5-10ug/ul）而且，蛋白酶抑制剂和去除核酸这两步非常重要（好像是核酸和sds混合后会产生像胶水一样的粘稠物，条带很难跑开）
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如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。
10楼2013-09-05 14:48:28
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