应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白跑胶两条带
61/1返回列表
查看: 2028  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dreamofyou

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白跑胶两条带 已有4人参与

最近纯化一个蛋白，过完His柱，跑胶出现了两条带，挨得很近，就差10几个氨基酸的样子，再过gel filtration， 还是两条带，每个fraction都是这样，请教各位这是什么原因？是因为降解了吗？什么方法可以避免？因为我需要非常纯的蛋白，谢谢大家~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-02 22:35:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
需要更多的信息，最好有张SDS-PAGE图，这样一目了然
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-07-02 23:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

627455987

木虫 (小有名气)
这个真不知道
回复此楼
3楼2010-07-04 00:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-04 10:59:30
首先挨得很近的两条带不要指望分子筛能把他们分开。我的经验告诉我分子量相差10KD一下的分子筛（supdex200）根本分不开。

你的蛋白是不是一批培养出来一次纯化出来的？是否来自于同一个菌落？不同批次纯化出来的蛋白会存在微小差别！蛋白中的二硫键没有充分打开，构象不同，电泳条带也会存在差异。

当然也有你说的降解的因素。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-04 10:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dreamofyou

银虫 (小有名气)
这个跑胶的部分实际上只是表达的一部分蛋白，这里称为A吧，大概245个氨基酸长度，有两条带，再表达的另外两批，分别比A少10个氨基酸和20个氨基酸，跑胶就没有两条带了。而且A是同一批培养出来的菌，也是一批纯化的，但是不是同一个菌落，这个会产生这么大的影响吗?而且纯化了两次都是这样的。我就想知道有没有办法可以避免这种现象？
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-04 17:49:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):单克隆是必须的，我也这么做 2010-07-04 22:53:26
引用回帖:
Originally posted by dreamofyou at 2010-07-04 17:49:30:
这个跑胶的部分实际上只是表达的一部分蛋白，这里称为A吧，大概245个氨基酸长度，有两条带，再表达的另外两批，分别比A少10个氨基酸和20个氨基酸，跑胶就没有两条带了。而且A是同一批培养出来的菌，也是一批纯化的 ...

我以前的时候没有这样的感念，认为同一次转化的不同克隆应该没有差别，事实上我分批次纯化出来不同克隆的蛋白SDS-PAGE显示三条条带。
现在我都是挑取一个克隆，然后把它在平板上画线，以后都是用这一个克隆的后代。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-07-04 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dreamofyou 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 东南大学364求调剂 +4 JasonYuiui 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:36 by Linda Hu
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭