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ankang0910

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求解答：纯化后的蛋白跑胶有杂带

纯化后的his标签蛋白，浓度有0.7~0.8，跑胶后发现接收的样品全部有杂带，不纯，小弟第一次做这方面的试验，纯化后的蛋白要做单抗的，不知该如何改进，哪方面出了问题。请各位前辈帮助。谢谢！！
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实验顺利！！
1楼2010-10-15 09:04:00
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
ankang0910(金币+1):谢谢你，洗脱条件是elutionbuffer的梯度么？我设了4个，接的样都不纯。 2010-10-15 09:15:59
纯化后不一定就会只有一条带啊，有杂带说明没有纯化好啊。可以摸索不同的洗杂条件，把杂蛋白尽可能的都洗杂掉。
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2楼2010-10-15 09:11:22
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
做单抗不一定就用纯蛋白啊，可以切胶回收做抗体用啊。
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3楼2010-10-15 09:12:18
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1):感谢参与~ 2010-10-15 12:31:09
我说的是摸索不同的洗杂条件，比如咪唑梯度洗杂，盐浓度梯度洗杂，杂蛋白洗不干净洗脱液设梯度是没有用的。
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4楼2010-10-15 10:38:24
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wutongyuwei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王会征 at 2010-10-15 09:12:18
做单抗不一定就用纯蛋白啊，可以切胶回收做抗体用啊。

你好，有切胶回收做抗体的详细步骤吗？我的蛋白也是纯化好久，摸索条件也纯化不出来。望给以切胶做胶回收的全面指导。谢谢了。
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5楼2014-12-03 20:32:37
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