24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2267  |  回复: 14

anni8953

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS跑蛋白新手求助

我跑的条带不是很清晰 背景颜色较深
条带集中在胶的上半部分
用的是12%的分离胶 5%浓缩胶
70V转120V
1.5mm 15teech的梳子
上样量 30μg 15ml
求解
SDS跑蛋白新手求助
2013-9-4-1.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anni8953

新虫 (初入文坛)

浓缩胶需要染色脱色吗?
我染色时摇会把浓缩胶摇下来
而且感觉浓缩胶上有条带

还有marker有拖尾情况怎么解决?
2楼2013-09-04 16:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-09-06 07:50:40
anni8953: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢啦 分离胶浓度下降之后就成功了 2013-10-14 18:58:33
上样太多,分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个,蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
3楼2013-09-04 22:09:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

marker有拖尾估计是跑的时间太长了(因为浓缩胶浓度太高)下面小分子量的蛋白扩散了
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
4楼2013-09-04 22:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anni8953

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:11:22
marker有拖尾估计是跑的时间太长了(因为浓缩胶浓度太高)下面小分子量的蛋白扩散了

是浓缩胶浓度太高
不是分离胶浓度高?
溴酚蓝都跑到底部了 但是蛋白都在中上部的原因是什么呢?
5楼2013-09-05 08:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anni8953

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:09:20
上样太多,分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个,蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~

额 有clean-up试剂盒 但是老师不让用的说
肿么看出来的核算较多捏?
这样跑双向是不是会有影响啊?
新手不懂求教啊!!!
6楼2013-09-05 08:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anni8953

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tujuo at 2013-09-04 22:09:20
上样太多,分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个,蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~

上样量打错了
30μg 15μl
7楼2013-09-05 08:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-09-06 07:53:11
我跑胶的时候基本上是习惯吧浓缩胶弄掉,你这个是考染吗?胶有点脏的说。
5%浓缩12%分离一般是没问题的,蛋白为什么在中间的看你蛋白的大小啊,没有小分子量的蛋白的话下面没蛋白也正常啊。你这个是什么蛋白啊?去杂质可以用冷丙酮沉淀过夜,可以去一部分,不过蛋白也会损失一部分。
8楼2013-09-05 09:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tujuo

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by anni8953 at 2013-09-05 08:24:30
是浓缩胶浓度太高
不是分离胶浓度高?
溴酚蓝都跑到底部了 但是蛋白都在中上部的原因是什么呢?...

打错了,是分离胶太高。一般用不到10%以上的分离胶
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
9楼2013-09-05 14:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖 2013-09-06 07:57:32
其实单独跑电泳的话上样不用太多,上太多了带与带之间的分界就容易模糊,尤其是蛋白条带密集的区域。我一般上样5ul就能跑的很清楚(我的样品蛋白浓度高有5-10ug/ul)而且,蛋白酶抑制剂和去除核酸这两步非常重要(好像是核酸和sds混合后会产生像胶水一样的粘稠物,条带很难跑开)
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
10楼2013-09-05 14:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anni8953 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 一志愿085404,总分291,四级已过,求调剂 +10 阿俊阿俊阿俊 2026-04-04 12/600 2026-04-09 16:18 by lin-da
[考研] 085404 293求调剂 +7 勇远库爱314 2026-04-08 7/350 2026-04-09 16:02 by 猪会飞
[考研] 278求调剂 +27 范婷娜 2026-04-07 30/1500 2026-04-09 15:59 by 探123
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-05 15/750 2026-04-09 13:36 by 故人??
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 280求调剂 +9 李rien 2026-04-04 9/450 2026-04-08 13:20 by lijunpoly
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +18 gtw1 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 18:16 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
[考研] 一志愿华中农业大学0710(A)初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 求调剂 +5 小沢 2026-04-03 5/250 2026-04-06 22:45 by 875465
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二!! 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 306求调剂 +3 hyb上名工 2026-04-02 3/150 2026-04-04 18:12 by 热情沙漠
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
信息提示
请填处理意见